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內(nèi)蒙古自治區(qū)呼和浩特市
2026-02-19 11:17:58
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2026-02-19 05:36:24
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2026-02-16 21:49:58
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2026-02-16 16:04:46
WB 轉(zhuǎn)膜后怕白做？3 種快速判斷蛋白轉(zhuǎn)印的方法
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實驗介紹
【應用簡介】
核酸和蛋白質(zhì)是組成生命的主要物質(zhì)，研究細胞內(nèi)RNA與蛋白結(jié)合情況，可以了解轉(zhuǎn)錄后調(diào)控網(wǎng)絡的動態(tài)過程，幫助我們發(fā)現(xiàn)的miRNA的調(diào)節(jié)靶點，RIP檢測實驗是應用于蛋白與RNA互作關系的重要參考。
【技術原理圖】
【實驗方法】
第一步：細胞裂解液的制備
第二步：磁珠與抗體的準備
第三步：RNA結(jié)合蛋白免疫沉淀
第四步：用蛋白酶?對RNA-蛋白復合物進行消化
第五步：RNA純化
第六步：對結(jié)合在復合物上的RNA反轉(zhuǎn)錄，合成cDNA
第七步：Q-PCR驗證RNA
案例展示
技術總結(jié)
【常見問題】
1、經(jīng)過免疫沉淀后的RNA濃度過低；
2、Input組目的條帶無擴增；
3、RNA純度未在1.8-2.1之間；
4、陰性對照IgG反應中有目的條帶。
【注意事項】
1、RIP反應體系中的試劑和抗體中均需保證無RNA酶；
2、細胞樣本的數(shù)量較大，應按照所需要求提供細胞樣本數(shù)量；
3、選購的相應的抗體應達到IP實驗級別，并通過陰性實驗反饋結(jié)果可信性。
送檢與交付標準
| 樣品類型 | 樣品需求 | 保存條件 | 運輸條件 | 備注 |
|---|---|---|---|---|
| 動物組織 | 單個樣品>0.1g，2mlEP管或凍存管裝，不要過量；樣本應盡量新鮮，如不能立即提取蛋白或核酸，應液氮速凍后凍存于-80℃或更低，凍存樣本避免反復凍融以致降解 | -80℃ | 干冰 | 所有樣本均須有唯一標記，且標記清晰可識 |
| 種子樣本 | 去殼新鮮或保存于液氮中的的種子樣本，單個樣品>0.2g。 | -80℃ | 干冰 | |
| 貼壁/懸浮細胞 | 1. 總RNA或蛋白：106cell/指標、漿/核RNA或蛋白：107cell/指標、線粒體RNA或蛋白：2*107 cell/指標，樣本盡量新鮮，細胞收取后直接加Trizol（QPCR檢測）或直接凍存于-80℃ 2. 若細胞處理（加藥、轉(zhuǎn)染、感染）后狀態(tài)差應酌情加大收樣量 | -80℃ | 干冰 | |
| 全血/血清樣品 | 用抗凝管保存的外周血 5~10ml，骨髓 1~3ml； -80℃保存不超半周的白細胞勻漿>400μl，每 400μl 加入 400μl Trizol。 | -80℃ | 干冰 | |
| 石蠟包埋樣品 | 由標準的石蠟包埋盒包埋的石蠟塊，有效厚度大于 0.1cm； 新鮮的 FFPE 組織切片，每片厚度不超過 10μm，2~8 張，表面積不超過 250mm2。 | -20℃ | 冰袋 | |
| 抗體 | 1. 按樣本種屬提供滿足相應實驗要求的抗體； 2. 按抗體說明書要求寄送，盡量避免分裝；如分裝，確保量足夠進行實驗，并提供抗體說明書。 3.保存抗體的抗體管上應有能夠識別此抗體的標記，抗體的量應大于實驗所需的量。 | -20℃ | 冰袋 | |
| 引物 | 干粉，≥1OD，如進行預實驗，每個基因至少提供兩對引物， 附帶公司引物合成單。 | -20℃ | 冰袋或常溫 |
電話：400-691-6686
在線時間：8:00-24:00
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