核酸提取
核酸具有貯存和傳遞遺傳信息等重要生物功能，是分子生物學(xué)研究的主要對(duì)象。采用常規(guī)吸附柱法抽提樣本中的DNA、RNA，為下游實(shí)驗(yàn)提供高純度和高濃度的模板。
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實(shí)驗(yàn)介紹
【技術(shù)原理】
核酸具有貯存和傳遞遺傳信息等重要生物功能，是分子生物學(xué)研究的主要對(duì)象。采用常規(guī)吸附柱法抽提樣本中的DNA、RNA，為下游實(shí)驗(yàn)提供高純度和高濃度的模板。
DNA提取方法：對(duì)基因組DNA的提取方法主要有 CTAB，SDS和其他如玻璃珠法，酶法等。質(zhì)粒DNA的提取主要有堿裂解法和煮沸法；線粒體，葉綠體DNA的提取主要有差速離心結(jié)合SDS法。
RNA提取方法：異硫氰酸胍/苯酚法?；緦?shí)驗(yàn)原理：細(xì)胞在變性異硫氰酸胍作用下裂解，核酸釋放。DNA和RNA在特定pH下溶解度不同而分別于體系的中間相與水相，得以分離。進(jìn)行有機(jī)溶劑抽提，沉淀，得到純凈RNA。
【實(shí)驗(yàn)流程】
交付標(biāo)準(zhǔn)
常見(jiàn)問(wèn)題
【常見(jiàn)問(wèn)題】
1、洗脫產(chǎn)物DNA量很少或沒(méi)有
a、樣品中細(xì)胞濃度低；
b、樣品裂解不充分；
c、DNA吸附不充分。
2、DNA影響后續(xù)酶反應(yīng)實(shí)驗(yàn)
a、乙醇有殘留；空離完成后再將吸附柱置室溫或溫箱2min左右，徹底去除乙醇。
3、核酸降解
a、樣本不新鮮（尤其對(duì)于RNA而言）；
b、前處理不當(dāng)（樣本量過(guò)大）。
送檢與交付標(biāo)準(zhǔn)
| 樣品類型 | 樣品需求 | 保存條件 | 運(yùn)輸條件 | 備注 |
|---|---|---|---|---|
| 動(dòng)物組織 | 單個(gè)樣品>0.1g，2mlEP管或凍存管裝，不要過(guò)量；樣本應(yīng)盡量新鮮，如不能立即提取蛋白或核酸，應(yīng)液氮速凍后凍存于-80℃或更低，凍存樣本避免反復(fù)凍融以致降解 | -80℃ | 干冰 | 所有樣本均須有唯一標(biāo)記，且標(biāo)記清晰可識(shí) |
| 種子樣本 | 去殼新鮮或保存于液氮中的的種子樣本，單個(gè)樣品>0.2g。 | -80℃ | 干冰 | |
| 貼壁/懸浮細(xì)胞 | 1. 總RNA或蛋白：106cell/指標(biāo)、漿/核RNA或蛋白：107cell/指標(biāo)、線粒體RNA或蛋白：2*107 cell/指標(biāo)，樣本盡量新鮮，細(xì)胞收取后直接加Trizol（QPCR檢測(cè)）或直接凍存于-80℃ 2. 若細(xì)胞處理（加藥、轉(zhuǎn)染、感染）后狀態(tài)差應(yīng)酌情加大收樣量 | -80℃ | 干冰 | |
| 全血/血清樣品 | 用抗凝管保存的外周血 5~10ml，骨髓 1~3ml； -80℃保存不超半周的白細(xì)胞勻漿>400μl，每 400μl 加入 400μl Trizol。 | -80℃ | 干冰 | |
| 石蠟包埋樣品 | 由標(biāo)準(zhǔn)的石蠟包埋盒包埋的石蠟塊，有效厚度大于 0.1cm； 新鮮的 FFPE 組織切片，每片厚度不超過(guò) 10μm，2~8 張，表面積不超過(guò) 250mm2。 | -20℃ | 冰袋 | |
| 抗體 | 1. 按樣本種屬提供滿足相應(yīng)實(shí)驗(yàn)要求的抗體； 2. 按抗體說(shuō)明書(shū)要求寄送，盡量避免分裝；如分裝，確保量足夠進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，并提供抗體說(shuō)明書(shū)。 3.保存抗體的抗體管上應(yīng)有能夠識(shí)別此抗體的標(biāo)記，抗體的量應(yīng)大于實(shí)驗(yàn)所需的量。 | -20℃ | 冰袋 | |
| 引物 | 干粉，≥1OD，如進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，每個(gè)基因至少提供兩對(duì)引物， 附帶公司引物合成單。 | -20℃ | 冰袋或常溫 |
電話：400-691-6686
在線時(shí)間：8:00-24:00
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