原代及干細(xì)胞鑒定
原代及干細(xì)胞鑒定可通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)對(duì)細(xì)胞特異性表面標(biāo)記進(jìn)行分析、堅(jiān)定。
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實(shí)驗(yàn)介紹
【技術(shù)原理】
利用不同熒光物質(zhì)標(biāo)記的單克隆抗體，與待測(cè)成分作用，然后上流式細(xì)胞儀檢測(cè)待測(cè)細(xì)胞。待測(cè)細(xì)胞隨流動(dòng)室內(nèi)的流動(dòng)鞘液排列成單列，一個(gè)個(gè)迅速通過(guò)激光聚焦區(qū)，激光在對(duì)每個(gè)細(xì)胞進(jìn)行照射時(shí)可同時(shí)得到前向角散射和側(cè)向角散射2種散射光以及激發(fā)熒光標(biāo)記物發(fā)出的信號(hào)，利用這些信號(hào)，可計(jì)算出相對(duì)含量，從而得到各細(xì)胞群的相對(duì)比值。
我們常用的檢測(cè)指標(biāo)為
間充質(zhì)干細(xì)胞（MSCs）： 表達(dá)CD73\CD90\CD105\CD44，不表達(dá)CD45\CD34\CD14\CD11b\CD19\HIL-DR
腫瘤干細(xì)胞（CDCs）：CD24\CD44\CD133\CD271\CD304\CD326
【實(shí)驗(yàn)流程】
Step1：制成單細(xì)胞懸液（組織樣本）
Step2：溶血（細(xì)胞樣本無(wú)需進(jìn)行此步驟）
Step3：離心去上清
Step4：調(diào)整細(xì)胞密度
Step5：加入相應(yīng)的標(biāo)記抗體
Step6：孵育
Step7：洗滌后離心去上清
Step8：上機(jī)檢測(cè)
注意事項(xiàng)
國(guó)際細(xì)胞治療協(xié)會(huì)間充質(zhì)和組織干細(xì)胞委員會(huì)2006年提出了MSC鑒定的最低標(biāo)準(zhǔn)，關(guān)于細(xì)胞表型的要求是表達(dá)CD90， CD105和CD73，不表達(dá)CD45, CD34, CD14或CD11b, CD79a或CD19和HLA-DR；陽(yáng)性指標(biāo)都需要染色，陰性指標(biāo)一般選擇2-3個(gè)指標(biāo)，因?yàn)槭亲黾?xì)胞表型鑒定，所以要配齊同型對(duì)照。為保證所得結(jié)果的可靠性，每次實(shí)驗(yàn)前應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)熒光微球檢測(cè)儀器的變異系數(shù)。每次應(yīng)做陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照、質(zhì)控對(duì)照、以確保將各種試劑及操作過(guò)程對(duì)結(jié)果的影響降至最低。
送檢與交付標(biāo)準(zhǔn)
| 樣品類(lèi)型 | 樣品需求 | 運(yùn)輸條件 |
|---|---|---|
| 組織 | 離體后組織制成單細(xì)胞懸液，加入PBS培養(yǎng)基內(nèi) | 常溫運(yùn)輸 |
| 活細(xì)胞 | 樣本量：1*106個(gè)細(xì)胞/TEST，加入PBS培養(yǎng)基內(nèi) | 常溫運(yùn)輸 |
| 血液 | 將血液采集在EDTA肝素鈉的抗凝采血管內(nèi) | 常溫運(yùn)輸 |
電話：400-691-6686
在線時(shí)間：8:00-24:00
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