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Southern Blot

Southern印跡雜交(Southern blot)是1975年由英國(guó)人southern創(chuàng)建,是研究DNA圖譜的基本技術(shù),在遺傳病診斷、DNA圖譜分析及PCR產(chǎn)物分析等方面有重要價(jià)值。

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實(shí)驗(yàn)介紹

【技術(shù)原理】

       將待測(cè)的 DNA 樣品固定在硝酸纖維膜或尼龍膜等固相上,加入標(biāo)記的核酸探針進(jìn)行雜交。按照堿基互補(bǔ)配對(duì)原則,核酸探針會(huì)與固相上的DNA同源序列進(jìn)行互補(bǔ),加入顯色系統(tǒng)即能顯示出雜交信號(hào),通過(guò)檢測(cè)信號(hào)的有無(wú)、強(qiáng)弱可以對(duì)樣品定性、定量分析。


【技術(shù)應(yīng)用】

1、定性及定量分析基因組中特定基因;

2、基因突變分析及限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性分析。


【實(shí)驗(yàn)流程】


送檢與交付標(biāo)準(zhǔn)

樣品類型樣品需求保存條件運(yùn)輸條件備注
動(dòng)物組織單個(gè)樣品>0.1g,2mlEP管或凍存管裝,不要過(guò)量;樣本應(yīng)盡量新鮮,如不能立即提取蛋白或核酸,應(yīng)液氮速凍后凍存于-80℃或更低,凍存樣本避免反復(fù)凍融以致降解-80℃干冰所有樣本均須有唯一標(biāo)記,且標(biāo)記清晰可識(shí)
種子樣本去殼新鮮或保存于液氮中的的種子樣本,單個(gè)樣品>0.2g。-80℃干冰
貼壁/懸浮細(xì)胞

1. 總RNA或蛋白:106cell/指標(biāo)、漿/核RNA或蛋白:107cell/指標(biāo)、線粒體RNA或蛋白:2*107     cell/指標(biāo),樣本盡量新鮮,細(xì)胞收取后直接加Trizol(QPCR檢測(cè))或直接凍存于-80℃       

2. 若細(xì)胞處理(加藥、轉(zhuǎn)染、感染)后狀態(tài)差應(yīng)酌情加大收樣量

-80℃干冰
全血/血清樣品用抗凝管保存的外周血 5~10ml,骨髓 1~3ml; -80℃保存不超半周的白細(xì)胞勻漿>400μl,每 400μl 加入 400μl Trizol。-80℃干冰
石蠟包埋樣品由標(biāo)準(zhǔn)的石蠟包埋盒包埋的石蠟塊,有效厚度大于 0.1cm; 新鮮的 FFPE 組織切片,每片厚度不超過(guò) 10μm,2~8 張,表面積不超過(guò) 250mm2。-20℃冰袋
抗體

1. 按樣本種屬提供滿足相應(yīng)實(shí)驗(yàn)要求的抗體;

2. 按抗體說(shuō)明書(shū)要求寄送,盡量避免分裝;如分裝,確保量足夠進(jìn)行實(shí)驗(yàn),并提供抗體說(shuō)明書(shū)。

3.保存抗體的抗體管上應(yīng)有能夠識(shí)別此抗體的標(biāo)記,抗體的量應(yīng)大于實(shí)驗(yàn)所需的量。

-20℃冰袋
引物干粉,≥1OD,如進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn),每個(gè)基因至少提供兩對(duì)引物, 附帶公司引物合成單。-20℃冰袋或常溫




細(xì)胞交付標(biāo)準(zhǔn).jpg

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