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一、 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/span>

通過Elisa實(shí)驗(yàn)技術(shù)檢測(cè)各樣本中目的蛋白的表達(dá)。

二、 實(shí)驗(yàn)樣本

一、 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

    1. 標(biāo)準(zhǔn)品檢測(cè)值

    2. 標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)準(zhǔn)曲線

圖1  Rat IL-4標(biāo)準(zhǔn)曲線

   標(biāo)準(zhǔn)曲線結(jié)果顯示，本次IL-4檢測(cè)結(jié)果可信。

3.樣品檢測(cè)結(jié)果

圖2  Elisa檢測(cè)柱狀圖

一、 ELISA實(shí)驗(yàn)原理

本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中大鼠白細(xì)胞介素4（IL-4）水平。用純化的大鼠白細(xì)胞介素4（IL-4）捕獲抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被的微孔中依次加入大鼠白細(xì)胞介素4（IL-4），再與HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的大鼠白細(xì)胞介素4（IL-4）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測(cè)定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中大鼠白細(xì)胞介素4（IL-4）含量。

四、 實(shí)驗(yàn)通用儀器及試劑

1. 主要儀器

2.主要試劑

一、 實(shí)驗(yàn)步驟

3.1 樣品處理

浸提液我司提供。

3.2 ELISA檢測(cè)步驟（以試劑盒操作說明書為準(zhǔn)）

1. 標(biāo)準(zhǔn)品的加樣：設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；。

2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、待測(cè)樣

品孔。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。

3. 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育30分鐘。

4. 配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T 的 20 倍）倍稀釋后備用。

5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此

重復(fù)5次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。

7. 溫育：操作同3。

8. 洗滌：操作同5。

9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl，再加入顯色劑 B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯

色15分鐘. 

10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。

11. 測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測(cè)量各孔的吸光度（OD 值）。測(cè)定應(yīng)在加終止液

后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

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