RNA熒光原位雜交
將核酸探針的某一種核苷酸標(biāo)記上報(bào)告分子如生物素或直接標(biāo)記熒光素，可利用該報(bào)告分子與熒光素標(biāo)記的特異親和素之間的免疫化學(xué)反應(yīng)或直接經(jīng)熒光檢測(cè)體系在鏡下對(duì)待測(cè)核酸（mRNA、lncRNA、circRNA、miRNA）進(jìn)行定性、半定量或相對(duì)定位分析的一種實(shí)驗(yàn)方法。
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實(shí)驗(yàn)介紹
【技術(shù)原理】
RNA-FISH原理：如果待檢測(cè)的細(xì)胞或組織切片上的靶核酸與所用的核酸探針是同源互補(bǔ)的，二者經(jīng)‘’變性-退火-復(fù)性‘’，即可形成靶核酸與核酸探針的雜交體。將核酸探針的某一種核苷酸標(biāo)記上報(bào)告分子如生物素或直接標(biāo)記熒光素，可利用該報(bào)告分子與熒光素標(biāo)記的特異親和素之間的免疫化學(xué)反應(yīng)或直接經(jīng)熒光檢測(cè)體系在鏡下對(duì)待測(cè)核酸（mRNA、lncRNA、circRNA、miRNA）進(jìn)行定性、半定量或相對(duì)定位分析的一種實(shí)驗(yàn)方法。
【實(shí)驗(yàn)流程】
案例展示
細(xì)胞的circRNA熒光原位雜交
注意事項(xiàng)
1、烤好的組織切片需經(jīng)過(guò)脫蠟處理，二甲苯脫蠟不足會(huì)導(dǎo)致探針雜交強(qiáng)度和雜交效率降低、熒光背景高等，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果?？筛鶕?jù)實(shí)際情況延長(zhǎng)脫蠟時(shí)間。
2、酶消化注意事項(xiàng)：
①酶的濃度過(guò)高、消化時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或孵育溫度過(guò)高，會(huì)對(duì)細(xì)胞的結(jié)構(gòu)有一定的破壞，細(xì)胞核消失或細(xì)胞核辨認(rèn)不清，也會(huì)造成一定程度的組織脫片；
②酶消化不足會(huì)造成蛋白消化不透徹，降低組織的通透性以及雜交信號(hào)的強(qiáng)度和雜交率；
③消化酶均為現(xiàn)用現(xiàn)配。
3、由于熒光原位雜交探針雜交的區(qū)段長(zhǎng)，在組織或細(xì)胞塊切片中，可能出現(xiàn)人為的信號(hào)異常，如缺失、分離等。
送檢與交付標(biāo)準(zhǔn)
| 樣品類(lèi)型 | 樣品需求 | 保存條件 | 運(yùn)輸條件 | 備注 |
|---|---|---|---|---|
| 新鮮組織 | 新鮮取材組織，用 PBS 清洗干凈血液等，立即-80℃保存 | -80℃ | 干冰 | 所有樣本均須有唯一標(biāo)記，且標(biāo)記清晰可識(shí) |
| 一般固定組織 | 一般組織體積不超過(guò)2cmX2cmX0.5cm，固定時(shí)盡量保持組織的原有形態(tài)并清理干凈血液及多余部分，如腸道內(nèi)容物；固定液體積為組織大小的10倍以上，容器足夠容納組織不使其擠壓變形。標(biāo)注好固定液類(lèi)型和固定時(shí)長(zhǎng) | 常溫 | 常溫 | |
| 特殊固定組織 | 睪丸、眼球、脊髓、肌肉等組織：推薦使用對(duì)應(yīng)的特殊固定液進(jìn)行固定，以保證固定效果。如Bouin液，適用于睪丸組織、皮膚組織及眼球的固定 | |||
| 組織蠟塊 | 組織由標(biāo)準(zhǔn)的石蠟包埋盒包埋（尺寸為30*24*7mm），石蠟與組織要均勻接合，不能有裂痕；蠟塊厚度根據(jù)所需切片的數(shù)量而定，有效厚度至少要超過(guò) 0.1cm。盡量提供半年內(nèi)的組織蠟塊，超過(guò)半年的蠟塊抗原可能丟失，做免疫組化可能出現(xiàn)檢測(cè)不到蛋白。 | 常溫 | 常溫 | |
| 組織切片 | 需用防脫載玻片進(jìn)行撈片，并注明切片厚度、已烤片溫度與時(shí)間，組織應(yīng)在靠近切片下端 1/3 處。 | 4℃ | 冰袋 | |
| 細(xì)胞爬片 | 使用 12 孔板或 24 孔板專(zhuān)用細(xì)胞爬片，細(xì)胞爬片經(jīng)固定后用 PBS 洗滌 2~3 次，保存在 PBS 中，用封口膜密封孔板。每個(gè)爬片在孔板蓋上應(yīng)有唯一的標(biāo)記，并有電子版的分組信息，以防標(biāo)記在運(yùn)輸途中模糊。 | 常溫 | 常溫 | |
| 植物樣本 | 新鮮組織FAA固定，木質(zhì)化程度不高；對(duì)于較薄的葉片，如果要求平行葉片切片，難以保證切完整；根莖要求直徑>1mm | 常溫 | 常溫 | |
| 抗體 | 保存抗體的抗體管上應(yīng)有能夠識(shí)別此抗體的標(biāo)記，并附帶說(shuō)明書(shū)，抗體的量應(yīng)大于實(shí)驗(yàn)所需的量。組織切片、組織芯片按稀釋后 100μl 一張切片計(jì)算抗體用量， 24 孔板細(xì)胞爬片圓形蓋玻片按稀釋后 200μl 一張計(jì)算抗體用量，12 孔板細(xì)胞爬片圓形蓋玻片按稀釋后 400μl 一張計(jì)算抗體用量。 | -20℃ | 冰袋或干冰 |
電話：400-691-6686
在線時(shí)間：8:00-24:00
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