有可能最全的PCR類型總結(jié)：36種PCR類型及其定義、原理和用途
2025-07-03 15:38:51
來源/作者：普拉特澤-生物醫(yī)學(xué)整體課題外包平臺(tái)
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1. 擴(kuò)增片段長(zhǎng)度多態(tài)性PCR（Amplified fragment length polymorphism PCR，AFLP PCR）這是一種基于PCR的技術(shù)，利用消化的DNA片段的一段選擇性擴(kuò)增來為目標(biāo)基因組生成獨(dú)特的指紋圖譜。該技術(shù)可以快速為任何生物體生成大量標(biāo)記片段，而無需事先了解基因組序列。AFLP PCR使用限制性內(nèi)切酶消化基因組DNA，并允許接頭連接到片段的粘性末端。然后選擇一部分限制性片段，使用與銜接子序列互補(bǔ)的引物進(jìn)行擴(kuò)增。擴(kuò)增的序列在瓊脂糖凝膠電泳變性時(shí)分離和可視化。AFLP PCR用于多種應(yīng)用，如評(píng)估物種內(nèi)或密切相關(guān)物種之間的遺傳多樣性，推斷種群水平的系統(tǒng)發(fā)育和生物地理模式，生成遺傳圖譜和確定品種之間的相關(guān)性。2. 等位基因特異性PCR（Allele-specific PCR，AS-PCR）AS-PCR是一種基于等位基因特異性引物的技術(shù)，可用于分析單核苷酸多態(tài)性。AS-PCR也稱為（amplification refractory mutation system）ARMS-PCR，對(duì)應(yīng)于對(duì)兩個(gè)不同等位基因使用兩種不同的引物。一種是對(duì)正常PCR耐熱的突變引物組，另一種是對(duì)突變PCR反應(yīng)耐熱的正常引物組。這些引物的3'末端經(jīng)過修飾，使得一組引物可以擴(kuò)增正常等位基因，而其他引物可以擴(kuò)增突變等位基因。這種錯(cuò)配允許引物擴(kuò)增單個(gè)等位基因。廣泛應(yīng)用于鐮狀細(xì)胞性貧血、地中海貧血等單基因點(diǎn)突變檢測(cè)。也用于ABO血型基因型的直接測(cè)定。Alu PCR是一種快速簡(jiǎn)便的DNA指紋圖譜技術(shù)，基于對(duì)Alu重復(fù)元件包圍的許多基因組位點(diǎn)的同步分析。Alu元件是短段DNA，最初以黃體節(jié)桿菌（Alu）限制性核酸內(nèi)切酶的作用為特征。Alu元件是最豐富的轉(zhuǎn)座因子之一，在整個(gè)人類基因組中都有發(fā)現(xiàn)，它們?cè)谶M(jìn)化中發(fā)揮作用，并已被用作遺傳標(biāo)記在Alu PCR中，使用與這些序列互補(bǔ)的兩個(gè)熒光染料標(biāo)記的引物進(jìn)行 PCR，然后通過Alu插入已用于多種遺傳性人類疾病和各種形式的癌癥。因此，這種PCR在檢測(cè)這些疾病和突變中起著至關(guān)重要的作用。組裝PCR是一種從多個(gè)較短片段組組裝出大DNA寡核苷酸的方法。在PCR中，使用的寡核苷酸大小為18個(gè)堿基對(duì)，而在組裝中，使用高達(dá)50bp的PCR長(zhǎng)度以確保正確雜交。在PCR循環(huán)中，寡核苷酸與互補(bǔ)片段結(jié)合，然后被聚合酶填充。因此，該P(yáng)CR的每個(gè)循環(huán)都會(huì)隨機(jī)增加各種片段的長(zhǎng)度，具體取決于哪些寡核苷酸相互找到。組裝PCR用于提高所需蛋白質(zhì)的產(chǎn)量，也可用于產(chǎn)生大量RNA用于結(jié)構(gòu)或生化研究。5. 非對(duì)稱PCR（Asymmetric PCR）非對(duì)稱PCR是PCR的一種變體，用于優(yōu)先擴(kuò)增原始DNA的一條鏈而不是另一條鏈。非對(duì)稱PCR與常規(guī)PCR的不同之處在于所選鏈的引物量過大。隨著非對(duì)稱PCR的進(jìn)行，較低濃度的限制引物被定量摻入新合成的雙鏈DNA中并用完。因此，在耗盡限制性引物后，從過量引物形成靶向單DNA鏈的線性合成。當(dāng)只需要擴(kuò)增兩條互補(bǔ)鏈中的一條時(shí)，例如在測(cè)序和雜交探測(cè)中，它非常有用。基于低溫變性的冷PCR是一種新型PCR形式，可選擇性地從野生型和含突變體（或包含變體）序列的混合物中擴(kuò)增低豐度DNA變體，而不管突變類型或在擴(kuò)增子上的位置如何。該方法基于對(duì)臨界溫度的修改，在該溫度下，含突變的DNA優(yōu)先于野生型DNA退火。變性后有一個(gè)中間退火過程，允許野生型和突變等位基因雜交。這種錯(cuò)配會(huì)略微改變dsDNA的退火溫度。這些異源雙鏈體會(huì)熔化并用作模板。因此，更大比例的次要變異DNA將被擴(kuò)增并可用于后續(xù)輪次的PCR。PCR在腫瘤標(biāo)本突變的檢測(cè)中起著至關(guān)重要的作用，尤其是在異質(zhì)性腫瘤和體液中。該P(yáng)CR還有助于評(píng)估手術(shù)或化療后的殘留病灶以及疾病分期和分子分析，以便為個(gè)體患者提供預(yù)后或定制治療。菌落PCR是一種通過設(shè)計(jì)插入的DNA特異性引物來鑒定插入質(zhì)粒中的目標(biāo)DNA的方法。含有質(zhì)粒的細(xì)菌菌落可以使用兩組引物直接擴(kuò)增。第一組是擴(kuò)增插入序列的插入特異性引物，另一組是載體特異性側(cè)翼引物，用于擴(kuò)增插入的DNA以外的質(zhì)粒DNA。取細(xì)菌菌落并直接加入到含有所有其他PCR試劑的預(yù)混液中。菌落PCR的主要應(yīng)用是鑒定正確的連接以及將插入的 DNA 插入細(xì)菌以及酵母質(zhì)粒中。8. 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）是一種用于 DNA 體外復(fù)制的技術(shù)，可在短短幾個(gè)小時(shí)內(nèi)將 “目標(biāo)” DNA 序列選擇性擴(kuò)增數(shù)百萬(wàn)倍。PCR能夠使用DNA聚合酶合成特異性DNA片段，該酶參與細(xì)胞遺傳物質(zhì)的復(fù)制。這種酶合成 DNA的互補(bǔ)序列，因?yàn)橐粋€(gè)小片段（引物）連接到選擇開始合成的特定位點(diǎn)的一條DNA 鏈。引物限制了要復(fù)制的序列，結(jié)果是擴(kuò)增了數(shù)十億個(gè)拷貝的特定 DNA 序列。常規(guī)PCR應(yīng)用于選擇性DNA分離、DNA擴(kuò)增和定量、醫(yī)學(xué)和診斷方法、傳染病診斷、法醫(yī)研究和研究領(lǐng)域。9. 數(shù)字PCR（Digital PCR，dPCR）數(shù)字PCR （dPCR） 是一種定量PCR技術(shù)，為測(cè)量樣品中存在的DNA或RNA量提供了一種靈敏有效的方法。對(duì)于dPCR，在擴(kuò)增步驟之前，將初始樣品混合物分成大量單獨(dú)的孔，使每個(gè)孔中存在或不存在靶序列。根據(jù)擴(kuò)增反應(yīng)孔中是否存在熒光，計(jì)算原始樣品中存在的靶標(biāo)的絕對(duì)數(shù)量。具有熒光信號(hào)的孔被視為陽(yáng)性，評(píng)分為“1”，而沒有熒光信號(hào)的孔為陰性，評(píng)分為“0”。然后通過泊松統(tǒng)計(jì)分析確定初始樣品中存在的目標(biāo)序列的濃度。dPCR用于測(cè)定各種臨床標(biāo)本中DNA和RNA病毒、細(xì)菌和寄生蟲的總數(shù)，主要是在沒有經(jīng)過充分校準(zhǔn)的標(biāo)準(zhǔn)品的情況下。10. 快速循環(huán)PCR（Fast cycling PCR）快速循環(huán)PCR是一種基于PCR的技術(shù)，可擴(kuò)增特異性PCR產(chǎn)物，并顯著縮短循環(huán)時(shí)間。該過程的原理與常規(guī)PCR相同，唯一的區(qū)別是擴(kuò)增時(shí)間。該P(yáng)CR中使用的緩沖液提高了Taq DNA聚合酶對(duì)短單鏈DNA片段的親和力，將引物成功退火所需的時(shí)間縮短至僅5秒?？焖傺h(huán)PCR 對(duì)于需要快速循環(huán)的過程至關(guān)重要，也有助于快速診斷疾病和突變。11. 高保真PCR（High Fidelity PCR）高保真PCR是一種經(jīng)過修飾的PCR方法，它利用錯(cuò)誤率低的DNA聚合酶，可在目標(biāo)DNA的復(fù)制中實(shí)現(xiàn)高度的準(zhǔn)確性。在擴(kuò)增過程中，這種酶對(duì)正確的三磷酸核苷具有顯著的結(jié)合親和力。在聚合酶活性位點(diǎn)結(jié)合不正確的情況下，由于活性位點(diǎn)復(fù)合物的結(jié)構(gòu)，摻入速度會(huì)減慢。高保真擴(kuò)增對(duì)于結(jié)果取決于正確DNA序列的實(shí)驗(yàn)（如克隆、SNP分析、NGS應(yīng)用）至關(guān)重要。12. 高分辨率熔解PCR（High-Resolution Melt PCR，HRM PCR）熱啟動(dòng) PCR 是常規(guī)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）的一種改進(jìn)形式，可減少因室溫下非特異性 DNA 擴(kuò)增而產(chǎn)生的非目標(biāo)產(chǎn)物，同時(shí)降低引物二聚體的形成概率。與其他基因分型技術(shù)（如測(cè)序和Taqman SNP分型）相比，它具有極大的成本效益。這使其成為大規(guī)模基因分型項(xiàng)目的理想選擇。它快速而強(qiáng)大，因此能夠快速準(zhǔn)確地對(duì)大量樣品進(jìn)行基因分型。通過高質(zhì)量的HRM檢測(cè)，非遺傳學(xué)家可以在任何可以使用支持HRM的實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 機(jī)器的實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行強(qiáng)大的基因分型。13. 熱啟動(dòng)PCR（Hot start PCR）有可能最全的PCR類型總結(jié)：36種PCR類型及其定義、原理和用途。熱啟動(dòng)PCR的基本原理是從反應(yīng)混合物中分離一種或多種試劑，直到混合物在加熱時(shí)達(dá)到變性溫度。熱啟動(dòng)PCR可顯著降低非特異性結(jié)合、引物二聚體的形成，并且通常會(huì)提高產(chǎn)物產(chǎn)量。它還需要更少的工作量并降低污染風(fēng)險(xiǎn)。原位PCR是一種有效的方法，可檢測(cè)冷凍或石蠟包埋的細(xì)胞或組織切片中微量的稀有核酸序列，以將這些序列在細(xì)胞內(nèi)區(qū)室化。該方法涉及保留細(xì)胞形態(tài)的組織固定，然后用蛋白水解酶處理，為PCR試劑提供作用于目標(biāo)DNA的入口。靶序列通過試劑擴(kuò)增，然后通過標(biāo)準(zhǔn)免疫細(xì)胞化學(xué)方案進(jìn)行檢測(cè)。原位PCR適用于傳染病的診斷、DNA的定量、微量DNA的檢測(cè)，并廣泛用于器官發(fā)生和胚胎發(fā)生的研究。15. 序列間特異性（Intersequence specific PCR，ISS PCR）序列間特異性PCR（或ISSR-PCR）是一種DNA指紋圖譜分析方法，它使用從整個(gè)基因組中重復(fù)的特定片段中選擇的引物來產(chǎn)生獨(dú)特的指紋圖譜。該技術(shù)使用微衛(wèi)星（通常為 16-25 bp 長(zhǎng)）作為靶向多個(gè)基因組位點(diǎn)的單個(gè)引物PCR反應(yīng)中的引物，主要擴(kuò)增不同大小的SSR間序列。ISSR PCR可用于基因組指紋圖譜、遺傳多樣性和系統(tǒng)發(fā)育分析、基因組圖譜和基因標(biāo)記。 是聚合酶鏈反應(yīng)的眾多變體之一，用于在僅知道一個(gè)序列時(shí)擴(kuò)增DNA。常規(guī)PCR需要與靶 DNA的兩個(gè)末端互補(bǔ)的引物，但反向PCR允許進(jìn)行擴(kuò)增，即使只有一個(gè)序列可用，也可以從中設(shè)計(jì)引物。反向PCR涉及一系列限制性酶切，然后進(jìn)行連接，這會(huì)產(chǎn)生一個(gè)環(huán)狀片段，然后可以通過已知序列的單個(gè)片段引發(fā)PCR。然后，與其他PCR過程一樣，DNA被溫度敏感的 DNA聚合酶擴(kuò)增。反向PCR對(duì)于測(cè)定宿主DNA中各種轉(zhuǎn)座子和逆轉(zhuǎn)錄病毒的插入位置特別有用。17. 指數(shù)后線性PCR(Linear-After-The-Exponential PCR，LATE PCR）LATE PCR是非對(duì)稱PCR 的改進(jìn)，它使用比過量引物熔解溫度更高的限制性引物，當(dāng)限制性引物濃度在反應(yīng)中期降低時(shí)保持反應(yīng)效率。LATE-PCR從指數(shù)期開始，其中擴(kuò)增效率與常規(guī) PCR相似。一旦限制性引物耗盡，反應(yīng)突然切換到線性擴(kuò)增，單鏈產(chǎn)物繼續(xù)進(jìn)行許多額外的熱循環(huán)。18. 連接介導(dǎo)的PCR（Ligation mediated PCR）連接介導(dǎo)的PCR是常規(guī)PCR的一種改進(jìn)形式，最初只需知道一端，然后通過連接獨(dú)特的DNA 接頭添加第二端即可實(shí)現(xiàn)。連接介導(dǎo)的PCR利用稱為“接頭”的小DNA片段，這些片段最初連接到目標(biāo)DNA的片段上。然后使用旨在與接頭序列結(jié)合的PCR引物來擴(kuò)增靶片段。該方法用于 DNA 測(cè)序、基因組行走和DNA足跡。19. 長(zhǎng)范圍PCR（Long-Range PCR）長(zhǎng)范圍PCR是一種擴(kuò)增通常無法使用常規(guī)PCR方法或試劑擴(kuò)增的較長(zhǎng)DNA的方法。通過使用具有增強(qiáng)DNA結(jié)合的修飾高效聚合酶，可以實(shí)現(xiàn)長(zhǎng)片段的高效合成和準(zhǔn)確擴(kuò)增。這種方法允許在更短的時(shí)間內(nèi)擴(kuò)增更多擴(kuò)展的靶標(biāo)，并有效利用資源。20. 甲基化特異性PCR（Methylation-specific PCR，MSP）MSP是一種檢測(cè)和分析CpG島中DNA甲基化模式的方法。為了進(jìn)行MSP，通過兩個(gè)引物對(duì)修飾DNA，并使用兩個(gè)引物對(duì)進(jìn)行PCR，這兩個(gè)引物對(duì)分別是可檢測(cè)的甲基化DNA和未甲基化 DNA。DNA用亞硫酸氫鹽處理以將胞嘧啶轉(zhuǎn)化為尿嘧啶，然后用特異性引物選擇性擴(kuò)增甲基化序列甲基化模式的檢測(cè)是必不可少的，因?yàn)閱?dòng)子中CpG二核苷酸的過度甲基化會(huì)抑制基因表達(dá)。21. 小引物PCR（Miniprimer PCR）一種使用工程聚合酶和10個(gè)核苷酸“小引物”的新PCR方法。發(fā)現(xiàn)該方法揭示了標(biāo)準(zhǔn)引物無法檢測(cè)到的新型16SrRNA基因序列。小引物PCR使用熱穩(wěn)定聚合酶，該酶可以從短引物（9 或 10 個(gè)核苷酸）延伸而來。該方法允許PCR靶向較小的引物結(jié)合區(qū)域，并用于擴(kuò)增高度保守的 DNA序列，例如16S（或真核18S）rRNA基因。22. 多重 PCR（Multiplex PCR）多重PCR是一種常見的分子生物學(xué)技術(shù)，用于在單次PCR檢測(cè)運(yùn)行中擴(kuò)增多個(gè)靶標(biāo)。在多重 PCR中，多重引物和溫度介導(dǎo)的DNA聚合酶用于在熱循環(huán)儀中擴(kuò)增DNA。必須優(yōu)化為多重 PCR設(shè)計(jì)的所有引物對(duì)，以便在PCR過程中所有引物對(duì)的相同退火溫度都是最佳的。當(dāng)一次靶向多個(gè)序列時(shí)，可以從單次測(cè)試運(yùn)行中生成更多信息，否則將需要大量的試劑以及大量的時(shí)間和精力來執(zhí)行。該技術(shù)已應(yīng)用于基因分型、突變和多態(tài)性分析、微衛(wèi)星STR分析、病原體或轉(zhuǎn)基因生物檢測(cè)等多個(gè)領(lǐng)域。在診斷實(shí)驗(yàn)室中，多重PCR可用于檢測(cè)導(dǎo)致相同類型疾病的不同微生物。23. 納米粒子輔助 PCR （Nanoparticle-Assisted PCR，nanoPCR）納米顆粒相關(guān)PCR包括小分子物質(zhì)，這些物質(zhì)由增強(qiáng)反應(yīng)的特定物理性質(zhì)組成。涉及金納米顆粒的理論之一指出，這些顆粒吸附了一些聚合酶并管理系統(tǒng)中剩余的聚合酶量，這對(duì)于增強(qiáng)反應(yīng)的特異性可能是必要的。另一種理論解釋說，它們吸附引物對(duì)并降低完美配對(duì)和錯(cuò)配對(duì)引物之間形成雙鏈體時(shí)的熔解溫度，這導(dǎo)致反應(yīng)特異性的增加。納米顆粒相關(guān)PCR具有高靈敏度、高特異性、高選擇性等優(yōu)點(diǎn)，已廣泛應(yīng)用于病毒檢測(cè)和基因測(cè)序。巢式PCR是對(duì)PCR技術(shù)的一種有用的修改，其中在兩組引物的幫助下通過阻止非特異性結(jié)合來增強(qiáng)反應(yīng)的特異性。第一組引物在我們的靶DNA外部結(jié)合并擴(kuò)增較大的片段，而另一組引物在靶位點(diǎn)特異性結(jié)合。在第二輪擴(kuò)增中，第二組引物僅擴(kuò)增靶DNA。巢式PCR是系統(tǒng)發(fā)育研究和檢測(cè)不同病原體的有用方法。該技術(shù)具有更高的靈敏度；因此，即使樣品中含有較低的 DNA，也可以被擴(kuò)增，這在傳統(tǒng)的PCR技術(shù)中是不可行的。25. 重疊延伸PCR （Overlap extension PCR，OE-PCR）這種方法也稱為“通過重疊擴(kuò)展進(jìn)行拼接”或 SOEING。重疊延伸PCR是一種有價(jià)值的技術(shù)，通常用于克隆大型復(fù)雜片段、對(duì)克隆基因進(jìn)行編輯或?qū)蓚€(gè)基因元件融合在一起。它從較短的 DNA片段中產(chǎn)生長(zhǎng)DNA片段。它用于高效的基因克隆和多位點(diǎn)定向大片段的插入、缺失和替換。它被證明可用于定點(diǎn)誘變、嵌合分子的產(chǎn)生，甚至通過將較小的片段剪接在一起來克隆大基因片段。26. 定量PCR/實(shí)時(shí)PCR（Quantitative PCR/Real-Time PCR，qPCR）定量PCR（qPCR），也稱為實(shí)時(shí)PCR或?qū)崟r(shí)定量PCR，是一種基于PCR的技術(shù)，它將目標(biāo) DNA序列的擴(kuò)增與反應(yīng)中該DNA種類濃度的定量相結(jié)合。傳統(tǒng)PCR是一個(gè)耗時(shí)的過程，其中 PCR產(chǎn)物通過凝膠電泳進(jìn)行分析。qPCR通過在指數(shù)期提供產(chǎn)物的實(shí)時(shí)檢測(cè)來促進(jìn)分析。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的原理取決于熒光染料的使用。使用熒光染料或熒光標(biāo)記的寡核苷酸對(duì)樣品中存在的核酸濃度進(jìn)行定量。qPCR應(yīng)用于病原體的基因分型和定量、microRNA分析、癌癥檢測(cè)、微生物載量檢測(cè)和轉(zhuǎn)基因生物檢測(cè)。27. 基于重復(fù)序列的PCR（Repetitive sequence-based PCR，rep-PCR）基于重復(fù)序列的PCR（rep-PCR）是一種改進(jìn)的PCR技術(shù)，它使用靶向散布在整個(gè)細(xì)菌基因組中的非編碼重復(fù)序列的引物。這種非編碼、重復(fù)序列塊可以作為寡核苷酸探針的多個(gè)遺傳靶標(biāo)，從而能夠?yàn)閱蝹€(gè)細(xì)菌菌株生成獨(dú)特的DNA圖譜或指紋圖譜。rep-PCR的主要應(yīng)用是不同細(xì)菌的分子菌株分型。它還用于各種病原體的流行病學(xué)鑒別。28. 逆轉(zhuǎn)錄PCR（Reverse Transcriptase PCR，RT-PCR）逆轉(zhuǎn)錄PCR（RT-PCR）是傳統(tǒng)PCR的改進(jìn)，其中RNA分子首先轉(zhuǎn)化為互補(bǔ)DNA（cDNA） 分子，然后可以通過PCR擴(kuò)增。在RT-PCR中，首先使用逆轉(zhuǎn)錄酶將RNA模板轉(zhuǎn)化為互補(bǔ) DNA（cDNA）。然后，cDNA充當(dāng)使用PCR進(jìn)行指數(shù)擴(kuò)增的模板。RT-PCR可以在單管中進(jìn)行，也可以在不同的試管中作為兩個(gè)步驟進(jìn)行。一步法更有效，污染和摻入變異的機(jī)會(huì)更少。RT-PCR用于研究方法、基因插入、遺傳病診斷和癌癥檢測(cè)。29. 逆轉(zhuǎn)錄定量/實(shí)時(shí)PCR（Reverse-Transcriptase Quantitative/Real-Time PCR ，RT-qPCR）RT-PCR與qPCR的結(jié)合。這允許在擴(kuò)增后實(shí)時(shí)定量DNA。30. 核糖核酸酶H依賴性PCR（RNase H-dependent PCR）在RNase H依賴性PCR中，引物的3'端包含一個(gè)可移除的擴(kuò)增塊。封閉的引物只能根據(jù) RNase Henzyme在與互補(bǔ)靶序列雜交過程中的切割活性進(jìn)行擴(kuò)增。RNase H酶在低溫下具有非常低的酶活性，無需對(duì)DNA聚合酶進(jìn)行任何修飾即可實(shí)現(xiàn)熱啟動(dòng)。同樣，當(dāng)RNA殘基附近存在錯(cuò)配時(shí)，酶的切割效率會(huì)降低。因此，在RNase H酶的活性下，非特異性結(jié)合和引物二聚體形成減少，從而實(shí)現(xiàn)有效雜交。31. 單特異性引物PCR（Single Specific Primer PCR，SSP-PCR）單特異性引物PCR是一種基于PCR的技術(shù)，允許擴(kuò)增只有一段部分序列信息的基因。它允許基因組從已知區(qū)域單向行走到染色體的未知區(qū)域。這允許擴(kuò)增雙鏈DNA，即使序列信息僅在一端可用。允許擴(kuò)增只有部分序列信息可用的基因，并允許基因組從已知區(qū)域單向行走到染色體的未知區(qū)域。32. 固相PCR（Solid Phase PCR，SP-PCR） 是一種獨(dú)特的PCR技術(shù)，允許在固體支持物上擴(kuò)增靶核酸，其中一個(gè)或兩個(gè)引物固定在表面。引物的空間分離最大限度地減少了顯著不良的引物相互作用，從而防止了引物二聚體的形成，并允許更高的多重?cái)U(kuò)增。這種新方法的中心思想是將引物的5′端附著在表面上，而不是讓引物在散裝溶液中自由擴(kuò)散?？梢栽诒砻娌东@自由擴(kuò)散的 DNA 靶標(biāo)，然后由聚合酶復(fù)制?？截惐３指街诒砻妫跏?DNA 分子在退火步驟后返回溶液。附著拷貝的自由端與與其序列互補(bǔ)的引物（附著在表面）雜交，擴(kuò)增過程可以開始。自殺式PCR是最常用的研究，其中避免假陽(yáng)性和確保擴(kuò)增片段的特異性是最高優(yōu)先級(jí)。該方法只需要在PCR中使用一次任何引物組合，這不應(yīng)該用于任何陽(yáng)性對(duì)照PCR反應(yīng)。這些引物應(yīng)始終靶向在使用此特定引物或任何其他引物組之前從未擴(kuò)增過的基因組區(qū)域。這種安排可確保實(shí)驗(yàn)室中不存在來自先前PCR反應(yīng)的污染DNA，否則可能會(huì)產(chǎn)生假陽(yáng)性。自殺PCR用于古遺傳學(xué)研究，其中涉及檢查古代生物遺骸中保存的遺傳物質(zhì)。34. 熱不對(duì)稱交錯(cuò)PCR（Thermal asymmetric interlaced PCR，TAIL-PCR）TAIL-PCR是回收與已知序列相鄰的DNA片段的強(qiáng)大工具。TAIL–PCR在連續(xù)反應(yīng)中使用三個(gè)嵌套引物和一個(gè)具有低熔解溫度的任意簡(jiǎn)并引物，因此可以熱控制特異性和非特異性產(chǎn)物的相對(duì)擴(kuò)增頻率。該方法高度準(zhǔn)確，因此可以直接對(duì)未純化的TAIL-PCR 產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序。它還允許克隆全長(zhǎng)功能基因。
35. 降落PCR（Touch down PCR）降落PCR 是PCR的一種修飾，其中初始退火溫度高于引物的最佳Tm，并在隨后的循環(huán)中逐漸降低，直到達(dá)到 Tm 溫度或“降落溫度”。降落PCR提高了較高溫度下反應(yīng)的特異性，并通過降低退火溫度提高了接近尾聲的效率。36. 可變串聯(lián)重復(fù)序列PCR（Variable Number of Tandem Repeats PCR，VNTR-PCR）它們是法醫(yī)學(xué)個(gè)體化的重要標(biāo)志。在VNTR-PCR中，擴(kuò)增的片段在一個(gè)物種內(nèi)幾乎沒有變化，但確實(shí)顯示出物種之間的差異。它可以通過PCR從極少量的基因組脫氧核糖核酸（DNA）中成功擴(kuò)增。在基因分型工具中，基于VNTR-PCR分析代表了一種很有前途的結(jié)核分型方法。
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