基因調(diào)取
原核生物的基因是連續(xù)不間隔的,直接用限制酶從DNA切取就可得到目的基因，再PCR擴(kuò)增后就能得到大量目的基因。 真核細(xì)胞核基因組DNA編碼的基因，以及感染真核細(xì)胞的DNA病毒和反轉(zhuǎn)錄病毒基因組編碼基因，統(tǒng)稱真核基因。真核基因調(diào)取是指通以動(dòng)物組織或細(xì)胞為模板，提取獲得cDNA或gDNA，從中擴(kuò)增基因或啟動(dòng)子等功能元件。也可將基因片段或者各功能元件片段亞克隆至各載體。
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實(shí)驗(yàn)介紹
【技術(shù)原理】
原核生物的基因是連續(xù)不間隔的,直接用限制酶從DNA切取就可得到目的基因，再PCR擴(kuò)增后就能得到大量目的基因。
真核細(xì)胞核基因組DNA編碼的基因，以及感染真核細(xì)胞的DNA病毒和反轉(zhuǎn)錄病毒基因組編碼基因，統(tǒng)稱真核基因。真核基因調(diào)取是指通以動(dòng)物組織或細(xì)胞為模板，提取獲得cDNA或gDNA，從中擴(kuò)增基因或啟動(dòng)子等功能元件。也可將基因片段或者各功能元件片段亞克隆至各載體。
【原核流程】
【真核流程】
案例展示
臨床組織樣本的目的基因調(diào)取
送檢與交付標(biāo)準(zhǔn)
| 樣品類型 | 樣品需求 | 保存條件 | 運(yùn)輸條件 | 備注 |
|---|---|---|---|---|
| 動(dòng)物組織 | 單個(gè)樣品>0.1g，2mlEP管或凍存管裝，不要過量；樣本應(yīng)盡量新鮮，如不能立即提取蛋白或核酸，應(yīng)液氮速凍后凍存于-80℃或更低，凍存樣本避免反復(fù)凍融以致降解 | -80℃ | 干冰 | 所有樣本均須有唯一標(biāo)記，且標(biāo)記清晰可識(shí) |
| 種子樣本 | 去殼新鮮或保存于液氮中的的種子樣本，單個(gè)樣品>0.2g。 | -80℃ | 干冰 | |
| 貼壁/懸浮細(xì)胞 | 1. 總RNA或蛋白：106cell/指標(biāo)、漿/核RNA或蛋白：107cell/指標(biāo)、線粒體RNA或蛋白：2*107 cell/指標(biāo)，樣本盡量新鮮，細(xì)胞收取后直接加Trizol（QPCR檢測(cè)）或直接凍存于-80℃ 2. 若細(xì)胞處理（加藥、轉(zhuǎn)染、感染）后狀態(tài)差應(yīng)酌情加大收樣量 | -80℃ | 干冰 | |
| 全血/血清樣品 | 用抗凝管保存的外周血 5~10ml，骨髓 1~3ml； -80℃保存不超半周的白細(xì)胞勻漿>400μl，每 400μl 加入 400μl Trizol。 | -80℃ | 干冰 | |
| 石蠟包埋樣品 | 由標(biāo)準(zhǔn)的石蠟包埋盒包埋的石蠟塊，有效厚度大于 0.1cm； 新鮮的 FFPE 組織切片，每片厚度不超過 10μm，2~8 張，表面積不超過 250mm2。 | -20℃ | 冰袋 | |
| 抗體 | 1. 按樣本種屬提供滿足相應(yīng)實(shí)驗(yàn)要求的抗體； 2. 按抗體說明書要求寄送，盡量避免分裝；如分裝，確保量足夠進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，并提供抗體說明書。 3.保存抗體的抗體管上應(yīng)有能夠識(shí)別此抗體的標(biāo)記，抗體的量應(yīng)大于實(shí)驗(yàn)所需的量。 | -20℃ | 冰袋 | |
| 引物 | 干粉，≥1OD，如進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，每個(gè)基因至少提供兩對(duì)引物， 附帶公司引物合成單。 | -20℃ | 冰袋或常溫 |
電話：400-691-6686
在線時(shí)間：8:00-24:00
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