WB樣本粘稠怎么辦？
2025-02-21 14:59:27
來源/作者：普拉特澤-生物醫(yī)學整體課題外包平臺
你是否會碰到這樣的問題：在提取WB樣本的時候，加入裂解液后，離心發(fā)現(xiàn)管內(nèi)有非常多的膠狀物質，非常粘稠，即使多加裂解液也是無用，還會使得蛋白濃度降低。蛋白樣本若出現(xiàn)粘稠的情況，會對后續(xù)的檢測造成一定的影響，導致檢測結果不可靠，所以今天我們來研究一下導致的原因——普拉特澤生物承接WB等分子檢測相關服務上萬例，積累了操作大量經(jīng)驗，為大家詳細分享WB樣本粘稠問題，同時為廣大科研工作者開展線上的理論培訓與線下實操，可承接wb實驗外包服務。
【一】、蛋白樣本粘稠會造成什么情況?
1.樣品洗液困難：堵塞移液器：離心后，由于樣品粘稠，膠狀物會堵塞移液器頭，導致移液后上清液所剩無幾；無法分離上清液：樣品太過粘稠，移液時容易整體帶出，無法有效分離上清液。
2.無法測定及定量：樣品粘稠無法成為均一液體，導致蛋白定量（如使用BCA法）時OD值異常，無法進行準確的定量測定。
3.上樣困難：盡管加了loading buffer進行煮樣，上樣樣品仍然特別粘稠，很難加入到膠孔中
電泳結果不佳：SDS-PAGE時，粘稠的樣品會卡在點樣孔里，導致條帶不成直線，有嚴重拖尾，條帶不集中
4.蛋白丟失：粘稠物包裹蛋白導致無法釋放，樣品很難跑出理想的結果，有時甚至是完全沒有條帶。
【二】那么是什么造成蛋白質樣本如此粘稠的呢？
1.核酸殘團：在細胞裂解過程中，細胞中的DNA纏繞其他大分子物質，形成粘稠的“核酸殘團”。這些核酸殘團與蛋白質聚集在一起，使得樣本變得粘稠。核酸殘團的存在會降低蛋白提取效率，使得蛋白質丟失。
2.細胞碎片和油脂：裂解后的樣本中可能含有細胞碎片，如油脂、難溶蛋白等。這些成分也會增加樣本的粘稠度。
【三】如何有效降低蛋白樣本的粘稠？
1.使用柱式法提取蛋白：柱式法蛋白提取通過優(yōu)化的裂解液配方和離心管柱技術，可以有效提高裂解效率，阻截核酸，減少樣本粘稠度。
2.超聲破碎：利用超聲波的能量破壞蛋白復合物，切割染色質，改善樣本粘稠狀態(tài)。但是超聲處理可能產(chǎn)生泡沫，影響蛋白濃度測定及后續(xù)實驗。超聲產(chǎn)生的熱量可能導致蛋白質變性或降解，因此應避免用于磷酸化等敏感蛋白的研究。
3.使用核酸酶降解核酸：核酸酶可以降解樣本中的核酸，減少核酸殘團的形成，從而降低樣本粘稠度。
4.延長煮沸時間：在加入上樣緩沖液后，適當延長煮沸時間，可以使結合在基因組DNA上的蛋白充分釋放，同時導致基因組DNA的部分斷裂，降低樣本粘稠度。
5.反復抽吸：使用注射器反復抽吸樣本，可以打斷基因組DNA，改善樣本粘稠狀態(tài)。
冰凍三尺，非一日之寒，普拉特澤致力于幫助廣大科研工作者解決WB實驗過程中的各方面問題，不但授人以魚，亦授人以漁。
電話：400-691-6686
在線時間：8:00-24:00
微信關注公眾號
湘公網(wǎng)安備