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        巨噬細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)步驟與注意事項(xiàng)由普拉特澤生物為大家分享。巨噬細(xì)胞也稱組織細(xì)胞，是由血液中的單核細(xì)胞穿出血管后分化而成的。單核細(xì)胞進(jìn)入結(jié)締組織后，體積增大，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和線粒體增生，溶酶體增多，吞噬功能增強(qiáng)。巨噬細(xì)胞的壽命因所在組織器官而異，一般可存活數(shù)月或更長。普拉特澤生物承接細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)多例，也為基礎(chǔ)科研人員提供巨噬細(xì)胞實(shí)驗(yàn)外包服務(wù)。那關(guān)于實(shí)驗(yàn)巨噬細(xì)胞培養(yǎng)步驟，咱們來一個個看：

        一、巨噬細(xì)胞培養(yǎng)設(shè)施設(shè)備與器皿

        1、巨噬細(xì)胞培養(yǎng)設(shè)施設(shè)備

        （1）超凈工作臺：也稱凈化工作臺，分為側(cè)流式、直流式和外流式三大類。

        （2）無菌操作間：一般由衣間，緩沖間和操作間三部分組成；操作間放置凈化工作臺及二氧化碳培養(yǎng)箱、離心機(jī)、倒置顯微鏡等，緩沖間可放置電冰箱、冷藏器及消毒好的無菌物品等。

        （3）操作間：普通培養(yǎng)箱、離心機(jī)、水浴鍋、定時鐘、普通天平及日常分析處理物。

        （4）洗刷消毒間：烤箱、消毒鍋、蒸餾水處理器及酸缸等。

        （5）分析間：顯微鏡、計(jì)算機(jī)及打印等。

        2、巨噬細(xì)胞培養(yǎng)器皿

        液體儲存瓶、培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿、吸管、離心管、三角燒瓶、燒杯、量筒、漏斗、注射器等

        二、巨噬細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)步驟

        巨噬細(xì)胞也建有無限細(xì)胞系，大多來自小鼠，如P338D1、S774A.1、RAW264.7等，均獲惡性，培養(yǎng)中呈巨噬細(xì)胞形態(tài)和吞噬功能，易于傳代和瓶壁分離，但難以建株。培養(yǎng)巨噬細(xì)胞可用各樣方法和各種來源來獲取細(xì)胞，以小鼠腹腔取材法最為實(shí)用，其法如下：

        1、實(shí)驗(yàn)前三天，向每只小鼠腹腔內(nèi)注入無菌硫羥乙酸肉湯1mL（勿注入腸內(nèi)）。

        2、引頸殺死動物，手提鼠尾將全鼠浸入70%酒精中3～5秒。

        3、置動物于解剖臺上，用針頭固定四肢，雙手持鑷撕開皮膚拉向兩側(cè)，暴露出腹膜，但勿傷及腹膜壁。

        4、再用70%酒精擦洗腹膜壁后，用注射器吸10mLEagle液注入腹腔中，同時從兩側(cè)用手指揉壓腹膜壁，令液體在腹腔內(nèi)充分流動。

        5、用針頭輕輕挑起腹壁，使動物體微傾向一側(cè)，使腹腔中液體集于針頭下吸取入針管內(nèi)。

        6、小心拔出針頭，把液體注入離心管中，250g4℃離心10分鐘，去上清，加10mLEagle培養(yǎng)基。

        7、計(jì)數(shù)細(xì)胞，每只小鼠可產(chǎn)生20～30×105細(xì)胞，其中90%為巨噬細(xì)胞。

        8、為獲取3×105粘附細(xì)胞/平方厘米，需接種2.5×106/mL。

        9、為純化培養(yǎng)細(xì)胞，去除其它白細(xì)胞，接種數(shù)小時后，去除培養(yǎng)液，用Eagle液沖洗1～2次后，再加新Eagle培養(yǎng)液置37℃，5%CO2溫箱中培養(yǎng)。

        三、巨噬細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境注意事項(xiàng)

        1、保證無菌環(huán)境

        細(xì)胞培養(yǎng)是無菌操作技術(shù)，要求工作環(huán)境和條件必須保證無微生物污染和不受其它有害因素的影響。細(xì)胞培養(yǎng)室和設(shè)計(jì)原則是防止微生物污染和有害因素影響，要求工作環(huán)境清潔，空氣清新，干燥和無煙塵。細(xì)胞培養(yǎng)室的設(shè)計(jì)原則一般是無菌操作區(qū)設(shè)在室內(nèi)較少走動的內(nèi)側(cè)，常規(guī)操作和封閉培養(yǎng)于一室，而洗刷消毒在另一室。

        2、培養(yǎng)皿溫度

        維持培養(yǎng)細(xì)胞旺盛生長，必須有恒定而適宜的溫度。不同種類的細(xì)胞對培養(yǎng)溫度要求也不同。人體細(xì)胞培養(yǎng)的標(biāo)準(zhǔn)溫度為36.5℃±0.5℃，偏離一溫度范圍，細(xì)胞的正常代謝會受到影響，甚至死亡

        3、氣體環(huán)境

        開放培養(yǎng)時一般把細(xì)胞置于95%空氣加5%二氧化碳混合氣體環(huán)境中。二氧化碳既是細(xì)胞代謝產(chǎn)物，也是細(xì)胞生長繁殖所需成分，它在細(xì)胞培養(yǎng)中的主要作用在于維持培養(yǎng)基的pH值。

        好啦，那關(guān)于巨噬細(xì)胞培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)步驟與就講完啦，如果您還有其他的問題或有巨噬細(xì)胞實(shí)驗(yàn)外包的需求歡迎隨時聯(lián)系，普拉特澤生物隨時在線。