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大家好！今天普拉特澤生物照常跟大家一起學(xué)習(xí)新實驗——活性氧（ROS）檢測！活性氧（ROS）是含氧的化學(xué)反應(yīng)性化學(xué)物質(zhì)，活性氧檢測一案板可以通過燃亮染色后病理觀察或者用流式的方法進(jìn)行檢測。普拉特澤生物流式檢測平臺承接活性氧檢測多例，在對樣本的檢測與方法上都有專業(yè)的評估標(biāo)準(zhǔn)，本文就跟大家一起簡單聊聊什么是活性氧檢測~

氧是生命運動過程中不可缺少的一種氣體，人們一旦處于缺氧或者供氧不足的環(huán)境中，就會感到憋氣的痛苦甚至死亡。所以，自從發(fā)現(xiàn)氧以來氧一直被人們認(rèn)為是一種對人體百益而無一害的氣體。可是生命科學(xué)迅速發(fā)展的今天，人體內(nèi)的各種器官隨著年齡增大而不斷老化促使科學(xué)家們在各個領(lǐng)域探索原因與機(jī)制，1969年McCord與Fridovich發(fā)現(xiàn)在生化反應(yīng)過程中o獲得一個電子還原生成超氧自由基(0))進(jìn)而經(jīng)過紅血球的分離精制后獲得0的清除滅活酶并命名為超氧化物歧化酶，激發(fā)了大批的科學(xué)研究者致力于o，的生成過程、反應(yīng)活性、毒性、生理和病理等方面的研究。同時由0，衍生出來的過氧化氫(HO)羥自由基(OH)激發(fā)態(tài)氧(一重態(tài)氧或稱單線態(tài)氧0)也受到了人們的重視。

那么活性氧檢測有什么意義呢？

活性氧是生命活動中不可缺少的活性物質(zhì)，自由基在體內(nèi)可提高一些酶的活性，如核苷酸的合成和肝臟的解毒過程中，自由基可激活某些合成酶或解毒酶。自由基還參與機(jī)體內(nèi)一些活性物質(zhì)如前列腺素的合成。炎癥過程中，自由基可促進(jìn)炎性細(xì)胞吞噬細(xì)菌和殺死細(xì)菌，如中性粒細(xì)胞發(fā)生呼吸爆發(fā)時產(chǎn)生大量自由基，可殺死病原體。

ROS更多被喊予明確的病理意義，ROS可對細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)，核酸和蛋白分子產(chǎn)生氧化作用，引起其結(jié)構(gòu)和功能障礙。ROS增多導(dǎo)致機(jī)體氧化應(yīng)激反應(yīng)(Oxidative Stress)造成細(xì)胞損傷，參與多種病理機(jī)制。百種以上的疾病狀態(tài)都可能有ROS的參與。機(jī)體通過一系列抗氧化機(jī)制，維持ROS的平衡，如超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase.SOD)、過氧化氛酶(Catalase)等酶類和一些小分子還原物質(zhì)，可去除細(xì)胞生成的ROS。檢測細(xì)胞ROS的含量，可以了解ROS在細(xì)胞一些生理和病理狀態(tài)中的變化，分析藥物效應(yīng)和相關(guān)機(jī)制，由于ROS在體內(nèi)存在的半意期很短，僅為15秒左右，需要用敏感的方法對其進(jìn)行檢測，常用的ROS測定方法包括luminol及其它化合物與氧自由基的化學(xué)發(fā)光反應(yīng)、ROS的電子自旋共振(electron spin resonance,ESR)測定，和自由基反應(yīng)性熒光染料的測定方法。

我們最常用的方法是化學(xué)發(fā)光法，化學(xué)發(fā)光測定法是儀器分析中靈敏度最高的方法之一，它的特點是化學(xué)反應(yīng)與發(fā)光現(xiàn)象同時發(fā)生，從而有望成為不穩(wěn)定化合物的在線、原位分析的有效手段。

化學(xué)發(fā)光研究也是活性氧測定法研究領(lǐng)域中比較活躍的分支之一，特別是針對H₂O₂測定，有許多靈敏度高、選擇性好的化學(xué)發(fā)光體系。進(jìn)年來，在HO2測定方面開發(fā)了一系列高靈敏度的化學(xué)發(fā)光分析法，除此之外，目前比較成功的活性氧化學(xué)發(fā)光測定法主要有魯米諾(Luminol)法、光澤精法(Lucioenin)和甲殼動物熒光素(Cvpridina)法等。

再就是和自由基反應(yīng)性染料的測定方法，常用的是DCFH-DA。DCFH-DA本身沒有熒光，可以自由穿過細(xì)胞膜。進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)后，可以被細(xì)胞內(nèi)的酯酶水解生成DCFH。而DCFH不會通透細(xì)胞膜，因此探針很容易被積聚在細(xì)胞內(nèi)。細(xì)胞內(nèi)的活性氧能夠氧化無熒光的DCFH生成有熒光的DCF。綠色熒光強(qiáng)度與活性氧的水平成正比。在最大激發(fā)波長480 nm，最大發(fā)射波長525 nm處，使用熒光顯微鏡，流式細(xì)胞儀或激光共聚焦顯微鏡等檢測熒光信號。Rosup為活性氧陽性誘導(dǎo)藥物，根據(jù)其熒光信號強(qiáng)度，可分析活性氧的真正水平。

好啦，那關(guān)于活性氧檢測的介紹小編就介紹到這里啦，后面兩期給大家詳細(xì)分下化學(xué)發(fā)光法和熒光法（和自由基反應(yīng)性染料檢測法）的詳細(xì)操作步驟，如果您對活性氧檢測的檢測方法有什么疑問或有活性氧檢測外包的需求，歡迎隨時留言與技術(shù)討論~

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