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細(xì)胞凋亡檢測(cè)詳細(xì)實(shí)驗(yàn)步驟——細(xì)胞凋亡檢測(cè)外包

細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)檢測(cè)詳細(xì)步驟由普拉特澤生物流式檢測(cè)平臺(tái)總結(jié)分享，普拉特澤生物為廣大科研人員提供全面的生物醫(yī)學(xué)科研實(shí)驗(yàn)外包服務(wù)，真實(shí)準(zhǔn)確，值得信賴。

上篇我們給大家詳細(xì)解釋了什么是細(xì)胞凋亡，相信大家都有一個(gè)相對(duì)清晰的了解，那么說(shuō)完了細(xì)胞凋亡的概念我們來(lái)看看如何檢測(cè)細(xì)胞凋亡，本文分享的是用流式檢測(cè)細(xì)胞凋亡的實(shí)驗(yàn)步驟，一起來(lái)學(xué)習(xí)吧。

流式檢測(cè)實(shí)驗(yàn)步驟

第一步、制備凋亡檢測(cè)細(xì)胞：選擇一盤(pán)10cm皿陽(yáng)性細(xì)胞，打開(kāi)培養(yǎng)皿的蓋子，將細(xì)胞置于紫外線下照射2小時(shí)，或使用細(xì)胞凋亡陽(yáng)性對(duì)照試劑盒提前處理陽(yáng)性待測(cè)細(xì)胞。

第二步、收集凋亡檢測(cè)細(xì)胞：將待測(cè)陰性細(xì)胞與陽(yáng)性細(xì)胞的上清分別收集于15mL的離心管中，使用2mL的BSP沖洗細(xì)胞，加入1mL不含有EDTA的胰酶至37度的培養(yǎng)箱中消化，直到大片細(xì)胞都脫離培養(yǎng)皿底。用剛才收集的上清液終止消化后，轉(zhuǎn)移到剛才的15mL離心管內(nèi)，放到離心機(jī)上，2000rpm室溫離心5 min，棄上清。

第三步、清洗凋亡檢測(cè)細(xì)胞：用1mL常溫PBS重懸細(xì)胞，轉(zhuǎn)移至1.5mL離心管，棄上清，細(xì)胞清洗這一步很重要不能省略，防止影響上機(jī)檢測(cè)時(shí)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

第四步、凋亡檢測(cè)細(xì)胞計(jì)數(shù)：每組取2x10^6細(xì)胞。將計(jì)數(shù)板及蓋玻片擦拭干凈,并將蓋玻片蓋在計(jì)數(shù)板上，輕輕吹打細(xì)胞懸液,使細(xì)胞均勻分布;吸出少許細(xì)胞懸液滴在細(xì)胞入口,使細(xì)胞懸液充滿蓋玻片和計(jì)數(shù)板之間,靜置1-2 min,使細(xì)胞沉降;注意蓋玻片下不要有氣泡,也避免細(xì)胞懸液進(jìn)入旁邊的槽中。在顯微鏡下對(duì)A/B/C/D四個(gè)大格內(nèi)的細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù),壓在大格四周邊線上的細(xì)胞只計(jì)數(shù)壓在2條邊線上的細(xì)胞(如右側(cè)和下方);若鏡下有2個(gè)細(xì)胞組成的細(xì)胞團(tuán),則應(yīng)按單個(gè)細(xì)胞計(jì)算;若細(xì)胞團(tuán)數(shù)量較多,占細(xì)胞總量的10%左右,則說(shuō)明細(xì)胞分散不好會(huì)導(dǎo)致計(jì)算不準(zhǔn)確,需要重新制備細(xì)胞懸液。

第五步、凋亡檢測(cè)細(xì)胞染色：使用200uL緩沖液重懸細(xì)胞(2*106)，所有實(shí)驗(yàn)組與陰性對(duì)照需要雙染，陽(yáng)性對(duì)照需要設(shè)置兩個(gè)染料的單染管。雙染管加入5uLAnnexinV染料，5uL7-AAD，單染管加入單獨(dú)的5uLAnnexinV染料或5uL7-AAD，標(biāo)清楚單染染料名稱。用手彈勻，避光染色15 min。染色過(guò)程中準(zhǔn)備流式管和濾膜打開(kāi)流式細(xì)胞儀，檢查鞘液和廢液情況。

第六步、凋亡檢測(cè)細(xì)胞過(guò)濾：染色完畢后，加入1mLBPS，上離心機(jī)2000rpm，在室溫下離心5分鐘，棄上清。再加入100ulPBS重懸，過(guò)濾。

第七步、上流式細(xì)胞儀檢測(cè)：打開(kāi)SSC，FSC，BB515下的FITC通道，以及7-ADD通道，其他用不到的通道刪除，記錄檢測(cè)數(shù)據(jù)方便后期分析結(jié)果。

到此為止，細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)檢測(cè)詳細(xì)步驟我們就全部介紹完啦，還有不懂的或者補(bǔ)充的同學(xué)們可以給客服留言積極討論哦~有需要細(xì)胞凋亡檢測(cè)外包的老師歡迎隨時(shí)聯(lián)系普拉特澤，竭誠(chéng)為您服務(wù)。

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