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Question：同樣是蛋白電泳，SDS-PAGE和PAGE到底有啥不一樣？（普拉特澤生物提供長期穩(wěn)定的分子實驗外包服務）

答：SDS-PAGE 毫無疑問是 PAGE 的升級版，二者都是常用的電泳分離技術，尤其是 SDS-PAGE更為常用，幾乎是 WB 實驗的標配；而 PAGE（或強調為NativePAGE）相比之下在蛋白質實驗中較少用到。

在這篇文章中，我們將討論幾個問題：

SDS-PAGE與原版PAGE在原理與應用范圍上有什么區(qū)別？
為什么WesternBlot實驗需要用SDS-PAGE？
Native PAGE適用于什么情形？

關于兩種技術與應用領域的區(qū)別

簡單來說，首先發(fā)明出的PAGE是基礎版，這個基礎版的原理就是分子篩+電場。作為一個分離工具，用它跑什么分子都可以。但由于分離蛋白的需求，加上蛋白質分子的特性，為了在蛋白實驗中加強蛋白質的分離效果，于是就有人想到在樣本與緩沖液中額外加入SDS使蛋白質變性，使蛋白質分子在電泳過程中僅依據分子量大小進行分離，這就是SDS-PAGE。

它們的核心區(qū)別毫無疑問在于是否加入SDS（十二烷基硫酸鈉），這是一種離子型去垢劑，通過破壞蛋白質中的非共價鍵使之變性，從三維構象變成線性結構，這個過程通常被稱為蛋白質線性化。另一方面，SDS與蛋白質結合后形成復合物，通過賦予蛋白質大量負電荷來掩蓋蛋白質本身表面攜帶的電荷，使其在電泳時的遷移率僅由分子量大小決定，而不受其原始電荷或形狀的影響。

3 Western Blot為什么需要用SDS-PAGE

WB一般都使用SDS-PAGE分離蛋白質，原因有以下幾點：

1. 抗體識別線性表位：由于許多抗體只能識別蛋白質的線性表位，需要通過SDS-PAGE將蛋白質線性化，使其抗體表位暴露在外，以便抗體結合。

2. 分子量測定：變性后的蛋白質在電場中的遷移率僅與分子量有關，可以用Marker測量，從而準確估計目標蛋白的分子量。

3. 穩(wěn)定性：變性過程破壞了蛋白的活性，避免發(fā)生反應，蛋白理論上性質更穩(wěn)定一些。

4. 避免蛋白質聚集：變性過程破壞非共價相互作用，避免蛋白質聚集或形成復合物。跑WB為了后期抗體結合出清晰的條帶，需要讓樣本中的蛋白質混合物分離成清晰的一個一個的分子；一旦發(fā)生聚集，條帶就不準確了。

4 Native PAGE適用于做什么

原生版的PAGE是非變性的（NativePAGE），不加入SDS等變性劑，因此它最大的特點就是保留了蛋白質的活性。如果說SDS-PAGE是為了通過變性加強蛋白分離效果的魔改版，那么現(xiàn)在也有針對讓PAGE保留蛋白活性的魔改升級版，如BN-PAGE。

針對PAGE非變性這一特點，它更適合應用在以下領域：

1. 需保持蛋白質活性的情況：由于是非變性條件，蛋白質保持其高級結構，因此其生物活性也得到保留。如果此時電泳僅作分離，后續(xù)還要繼續(xù)研究如酶活性、配體結合能力以及其他需要保留原本功能的情況，就需要選擇非變性的PAGE進行分離。

2. 分析蛋白質聚集體或蛋白質-蛋白質相互作用：NativePAGE可以用于分析蛋白質復合物。由于保留了蛋白間的相互作用，因此某些蛋白質也可能會以多亞基復合物的形式一起遷移，并以不可預測的方式移動。這種復合物常表現(xiàn)為彌散狀條帶，而非通常所見的清晰的條帶。

文源自實驗室老司機
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