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  細(xì)胞運(yùn)動實驗包括體內(nèi)實驗和體外實驗，體內(nèi)實驗一般包括皮下移植瘤和原位移植瘤，我們之前已經(jīng)發(fā)過裸鼠成瘤的相關(guān)文章，那我們今天呢主要想給大家分享的是體外實驗。

細(xì)胞運(yùn)動的體外實驗常用方法有：劃痕實驗、侵襲實驗、趨化實驗。

劃痕實驗

細(xì)胞劃痕法是測定了腫瘤細(xì)胞的運(yùn)動特性的方法之一。在體外培養(yǎng)的單層細(xì)胞上，劃痕致傷，然后在加入藥物等實驗條件下觀察其對腫瘤細(xì)胞遷移的影響。

侵襲實驗

案例分享

transwell侵襲實驗，其實原理簡單地說就是用一層膜將高營養(yǎng)的培養(yǎng)液和低營養(yǎng)的培養(yǎng)液隔開，細(xì)胞放在低營養(yǎng)的培養(yǎng)液里，為了找吃的，細(xì)胞會往高營養(yǎng)的培養(yǎng)液里面跑，但是有膜擋著，所以要穿過膜才行。在膜上涂上一層基質(zhì)膠，模仿細(xì)胞外基質(zhì)，于是細(xì)胞要把基質(zhì)消化了才可以從低營養(yǎng)的培養(yǎng)液跑到高營養(yǎng)的培養(yǎng)液里面，最后我們檢測高營養(yǎng)的培養(yǎng)液里細(xì)胞量就可以知道細(xì)胞的侵襲能力了。

實驗步驟

（1）Matrigel在4℃過夜融化；?

（2）用4℃預(yù)冷的無血清培養(yǎng)基稀釋Matrigel至終濃度1 mg/mL，冰上操作；

（3）在chamber上室底部中央垂直加入100 μL稀釋后的Matrigel，37℃溫育4－5小時使其干成膠狀；

（4）待測細(xì)胞培養(yǎng)至對數(shù)生長期，消化細(xì)胞，用PBS和無血清培養(yǎng)基先后洗滌一次，用無血清培養(yǎng)基懸浮細(xì)胞，計數(shù)。

（5）在下室（即24孔板底部）加入含10％血清的培養(yǎng)基，上室加入細(xì)胞懸液，繼續(xù)在孵箱培養(yǎng)24小時；

（6）用鑷子小心取出chamber，吸干上室液體，移到預(yù)先加入約800 μL甲醇的孔中，室溫固定30分鐘；

（7）取出chamber，吸干上室固定液，移到預(yù)先加入約800 μL?Giemsa染液的孔中，室溫染色15－30分鐘；

（8）用小鑷子小心揭下膜，底面朝上晾干，移至載玻片上用中性樹膠封片；

（9）顯微鏡下取9個隨機(jī)視野計數(shù)，統(tǒng)計結(jié)果。

注意事項

（1）Matrigel在過高或過低的溫度均易凝固，因此操作所需槍頭和離心管應(yīng)提前在4℃預(yù)冷；

（2）鋪膠時保證液面水平，膠的厚度均勻一致，切勿產(chǎn)生氣泡；

（3）為了避免操作污染，每次實驗可預(yù)先另準(zhǔn)備一塊24孔普通培養(yǎng)板；

（4）細(xì)胞懸液加入膜中央，盡量保證液面水平；

（5）Chamber和膜上都無法標(biāo)記，操作時應(yīng)小心避免混淆實驗組和對照組；

（6）充分晾干，避免殘留水分導(dǎo)致鏡下聚焦不一致；

（7）小室內(nèi)邊緣殘留的細(xì)胞會影響實驗結(jié)果，用棉棒擦干。

趨化實驗

趨化性（Chemotaxis，亦被稱為化學(xué)趨向性）是趨向性的一種，指身體細(xì)胞、細(xì)菌及其他單細(xì)胞、多細(xì)胞生物依據(jù)環(huán)境中某些化學(xué)物質(zhì)而趨向的運(yùn)動。適于分析在基質(zhì)膠中快速或緩慢遷移的非貼壁細(xì)胞的趨化性反應(yīng)，例如淋巴細(xì)胞，在間質(zhì)流的腫瘤細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞的化學(xué)趨向性。正趨化性指趨向較高化學(xué)物質(zhì)濃度的運(yùn)動，而負(fù)趨化性則相反。

上室細(xì)胞可穿過聚碳酸酯膜進(jìn)入下室的細(xì)胞量可反映下室成分對上室細(xì)胞的趨化能力。

（1）細(xì)胞B對細(xì)胞A的趨化作用：將細(xì)胞A種于上室，細(xì)胞B種于下室，可以研究細(xì)胞B分泌或代謝產(chǎn)生的物質(zhì)對細(xì)胞A的趨化作用。

（2）趨化因子對細(xì)胞的趨化作用：將細(xì)胞種于上室，下室加入某種趨化因子，可研究該趨化因子對細(xì)胞的趨化作用。

為了便于大家更直觀地了解這三種實驗，我們做了一個小表格。

那關(guān)于細(xì)胞運(yùn)動實驗就介紹到這了，如果還有其他想了解的實驗細(xì)節(jié)歡迎大家來留言咨詢或討論哦。