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  亞硫酸氫鈉測(cè)序法（BSP）實(shí)驗(yàn)介紹由普拉特澤生物為大家總結(jié)分享。亞硫酸氫鹽測(cè)序是檢測(cè)細(xì)胞或組織中全部染色體DNA上甲基化情況的技術(shù)。普拉特澤生物表達(dá)檢測(cè)平臺(tái)專(zhuān)業(yè)提供亞硫酸氫鈉測(cè)序?qū)嶒?yàn)外包服務(wù)，本文我們先來(lái)看看亞硫酸氫鈉測(cè)序法的實(shí)驗(yàn)介紹~

  亞硫酸氫鈉測(cè)序法（BSP）是基于亞硫酸氫鹽能使DNA中未發(fā)生甲基化的胞嘧啶脫氨基轉(zhuǎn)變成尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶保持不變，行PCR擴(kuò)增所需片段，則尿嘧啶全部轉(zhuǎn)化成胸腺嘧啶，然后對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行高通量測(cè)序。通過(guò)分析不同樣品之間的甲基化差異，可研究DNA甲基化水平對(duì)基因表達(dá)的調(diào)控。

  直接測(cè)序法是建立在 MSP 基礎(chǔ)上進(jìn)一步深入研究 CpG 島各個(gè)位點(diǎn)甲基化情況的方法。重亞硫酸鹽使 DNA 中未發(fā)生甲基化的胞嘧啶脫氨基轉(zhuǎn)變成尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶保持不變，行PCR 擴(kuò)增(引物設(shè)計(jì)時(shí)盡量避免有 CpG，以免受甲基化因素的影響)所需片段，則尿嘧啶全部轉(zhuǎn)化成胸腺嘧啶。最后，對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序，并且與未經(jīng)處理的序列比較，判斷是否CpG位點(diǎn)發(fā)生甲基化。

  亞硫酸氫鈉測(cè)序法是一種可靠性及精確度很高的方法，能明確目的片段中每一個(gè) CpG 位點(diǎn)的甲基化狀態(tài)。在尋找有意義的關(guān)鍵性 CpG 位點(diǎn)上，有其他方法無(wú)法比擬的優(yōu)點(diǎn)。測(cè)序法以 CpG 島兩側(cè)不含 CpG 點(diǎn)的一段序列為引物配對(duì)區(qū)，所以能夠同時(shí)擴(kuò)增出甲基化和非甲基化靶序列。它的不足是耗費(fèi)時(shí)間和耗資過(guò)多，至少要測(cè)序 10 個(gè)以上的克隆才能獲得可靠數(shù)據(jù)，同時(shí)需要大量的克隆及質(zhì)粒提取測(cè)序，過(guò)程較為繁瑣、昂貴。

  亞硫酸氫鈉測(cè)序法的簡(jiǎn)單實(shí)驗(yàn)流程如下：

        1、引物設(shè)計(jì)與測(cè)試；

        2、基因組提取；

        3、亞硫酸氫鈉修飾DNA并純化回收修飾產(chǎn)物；

        4、PCR擴(kuò)增、產(chǎn)物回收并連入T載；

        5、測(cè)序分析；

        6、甲基化分析與數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)。

  亞硫酸氫鈉測(cè)序法我們先簡(jiǎn)單介紹到這里啦，下期咱們分步詳細(xì)講解BSP實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)步驟，如果您有還有關(guān)于BSP實(shí)驗(yàn)的問(wèn)題或有BSP檢測(cè)外包的需求歡迎隨時(shí)聯(lián)系普拉特澤~