欧美精品日韩在线视频-久久视频精彩在线观看-精品少妇人妻一区二区黑-欧美日韩中文字幕人妻-丁香九月婷婷综合在线-久久久亚洲熟妇熟女一区-久久久久免费看片-日本中文字幕人妻少妇在线-女同久久另类99精品国产,欧美 另类 自拍偷拍,中文字幕人妻系列懂色av,久久久亚洲精品男人的天堂

對(duì)于生信的小伙伴來(lái)說(shuō)，Western Blot是最常用的蛋白定量表征手段之一。WB不僅用于判斷蛋白是否表達(dá)，更重要的是用于半定量比較不同樣品中目標(biāo)蛋白的相對(duì)含量變化。通過(guò)對(duì)條帶灰度值的測(cè)量，并結(jié)合內(nèi)參蛋白進(jìn)行歸一化處理，可以實(shí)現(xiàn)對(duì)蛋白表達(dá)水平的可靠比較。

本期普拉特澤生物來(lái)分享如何使用Image J對(duì)WB進(jìn)行蛋白定量并用Graphpad美圖全過(guò)程。

1.打開(kāi)Image J軟件，跳出彈窗，如下圖所示；

2.點(diǎn)擊File—Open—選擇打開(kāi)目標(biāo)WB蛋白條帶；

3.依次點(diǎn)擊Image—Type—8bit；

4.去除背景影響，點(diǎn)擊Process—Subtract Background，在跳轉(zhuǎn)出的對(duì)話框，在Rolling ball radius 選擇50pixels；

5.設(shè)置參數(shù)，點(diǎn)擊Analyze—Set Measurements—選擇參數(shù)Area、Min& max gray value、Integrated density和Mean gray value；

 6.接著點(diǎn)擊矩形，勾選出條帶部分；

7.點(diǎn)擊Analyze—Gels—Select First Lane；接著再點(diǎn)擊Analyze—Gels—Plot Lanes；

8.在跳出的對(duì)話框，點(diǎn)擊直線，按住shift鍵，依次對(duì)各個(gè)峰進(jìn)行繪制封閉；

9.點(diǎn)擊魔法棒工具，依次點(diǎn)擊各個(gè)峰，會(huì)跳出的各個(gè)峰的面積，即為WB各個(gè)蛋白條帶的面積；按照上述步驟，重復(fù)平行操作3次。

10.復(fù)制值到Excel中，對(duì)所有值進(jìn)行內(nèi)參歸一化。

11.打開(kāi)Graphpad軟件，選擇Column，點(diǎn)擊create；

12.將數(shù)據(jù)導(dǎo)入到軟件中，點(diǎn)擊Analyze—選擇One-way ANOVA，點(diǎn)擊ok；

13.點(diǎn)擊繪圖，選擇Individual values，選擇帶數(shù)據(jù)點(diǎn)的柱形圖；

14.接著對(duì)圖形進(jìn)行美化，其中包括顏色、圖形邊框、字體、坐標(biāo)軸等，其最終效果圖如下圖所示：

ImageJ的WB定量，本質(zhì)是：在相同ROI下提取條帶積分灰度→扣背景→用內(nèi)參歸一化→轉(zhuǎn)換為可統(tǒng)計(jì)的表達(dá)量變化→使用繪圖軟件繪圖。大家學(xué)會(huì)了嗎？