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支原體檢測實驗方法介紹由普拉特澤生物表達(dá)檢測平臺總結(jié)分享。支原體是一類無細(xì)胞壁、形態(tài)多樣的原核細(xì)胞微生物，是目前發(fā)現(xiàn)的最小的微生物，普拉特澤生物表達(dá)檢測平臺為廣大科研人員提供支原體檢測實驗外包服務(wù)，歡迎咨詢哦。

支原體在細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)、傳代時極易污染。目前我們常用的支原體檢測方法有PCR法、DNA染色法、化學(xué)發(fā)光法、支原體培養(yǎng)法，我們來一個一個看：

1、PCR檢測支原體

這種方法是目前最常用的方法，它的檢測方式主要有凝膠電泳檢測和熒光定量檢測。其原理都是在支原體16S rRNA基因的保守區(qū)設(shè)計引物，通過檢測支原體DNA來檢測細(xì)胞中有無支原體的污染。如果有支原體的存在，則在瓊脂糖凝膠電泳或者熒光定量擴增時，就可以檢測到。這種方法的優(yōu)點是檢測靈敏度高，特異性好，檢測速度快。

2、DNA染色法檢測支原體

原理為使用DNA染色試劑（如：Hoechst 33258）對細(xì)胞進(jìn)行染色，由于支原體中的核酸也可以被著色，所以，如果有支原體污染，會在細(xì)胞表面或者培養(yǎng)基中見到大小不等、不規(guī)則的熒光著色顆粒，與細(xì)胞核呈現(xiàn)的橢圓形、更大更亮熒光形成鮮明對比。這種方法有很多種實驗檢測方式，如果作為簡單檢測來說，最大的優(yōu)點就是快速，直觀；但是它的靈敏度會比較低，在支原體污染不嚴(yán)重時容易得到模棱兩可的結(jié)果，只有在污染嚴(yán)重時才能得到可靠度較高的結(jié)果。小伙伴們?nèi)绻褂眠@種方法來進(jìn)行比較嚴(yán)謹(jǐn)?shù)臋z測，可參考《中國藥典》中的方法（見附錄）來設(shè)置相應(yīng)的對照及判定標(biāo)準(zhǔn)，但是相應(yīng)的檢測時間會有所延長。

3、化學(xué)發(fā)光法檢測支原體

化學(xué)發(fā)光檢測的原理是利用支原體內(nèi)特有的酶，與提供的底物相互作用，使其中的ADP轉(zhuǎn)化為ATP，熒光素酶可以利用產(chǎn)生的ATP與熒光素酶底物發(fā)生反應(yīng)，產(chǎn)生可檢測到的光，光可以被我們使用儀器檢測到。如果沒有支原體存在，熒光素酶就沒有足夠的ATP去發(fā)生反應(yīng)產(chǎn)生光，儀器檢測到的數(shù)值就比較低；如果有支原體存在，就可以使大量的ADP轉(zhuǎn)化為ATP，供熒光素酶發(fā)生反應(yīng)，產(chǎn)生大量的光，儀器檢測到的數(shù)值就比較高。這種方法的優(yōu)點是檢測的靈敏度高，速度快，但是只能檢測活的支原體。

4、支原體培養(yǎng)法

使用支原體肉湯培養(yǎng)基接種待測樣品（細(xì)胞培養(yǎng)上清等），經(jīng)過約7-21天的培養(yǎng)，觀察有無支原體的生長，以此來判斷細(xì)胞培養(yǎng)基中有無支原體存在。此種方法非常經(jīng)典，得到全世界范圍內(nèi)認(rèn)可，是被《中國藥典》2015版第三部分3301，歐洲藥典第六版2.6.7部分記載的支原體檢測方法。雖然被廣泛認(rèn)可，但是需要耗時超級長（約1個月）才能知道是否有污染。

好啦，這四種常見的支原體檢測方法小編就介紹完啦！有沒有幫到您呢？更多的關(guān)于支原體檢測疑問或者檢測方法請等待小編下期的分享哦，如果您也有支原體檢測外包的需求的話歡迎隨時給客服留言哦！

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