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是不是有不少小伙伴做分子實(shí)驗(yàn)的時(shí)候是不是經(jīng)常被質(zhì)粒轉(zhuǎn)化后的涂板結(jié)果搞得頭大？每次滿心期待地打開培養(yǎng)箱，看到的卻是平板上菌落糊成一片，根本沒法挑單克隆，這心情簡直比坐過山車還刺激。今天就來和大家嘮嘮質(zhì)粒轉(zhuǎn)化后涂板糊成一片可能的原因和解決辦法！普拉特澤生物一起帶大家理解理解。

糊板原因解析

1.感受態(tài)細(xì)胞質(zhì)量不佳：感受態(tài)細(xì)胞就像是運(yùn)輸質(zhì)粒的貨車，如果貨車本身質(zhì)量不好，那質(zhì)粒就很難順利到達(dá)細(xì)胞內(nèi)。感受態(tài)細(xì)胞活性低或者保存不當(dāng)或存在雜菌污染，都會導(dǎo)致轉(zhuǎn)化效率大大降低，涂板時(shí)就可能出現(xiàn)菌落分布不均或者糊成一片的情況。

2.質(zhì)粒濃度過高：轉(zhuǎn)化時(shí)質(zhì)粒濃度并非越高越好！如果質(zhì)粒濃度過高，轉(zhuǎn)化時(shí)進(jìn)入細(xì)胞的質(zhì)粒數(shù)量過多，就會讓細(xì)胞“不堪重負(fù)”，長出來的菌落就會密密麻麻地?cái)D在一起，看起來就像糊成了一片。

3.涂板菌液量過多：菌液量過多會使平板上接種的細(xì)菌數(shù)量遠(yuǎn)超正常水平。在適宜的培養(yǎng)條件下，細(xì)菌會大量繁殖，導(dǎo)致菌落之間相互擠壓、重疊。原本可以清晰分辨的單個(gè)菌落，由于生長空間不足，會緊密相連，形成一片模糊的區(qū)域，難以挑取單克隆進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

4.轉(zhuǎn)化操作不當(dāng)：轉(zhuǎn)化過程中，冰浴時(shí)間不夠、熱激溫度或時(shí)間不準(zhǔn)確、復(fù)蘇培養(yǎng)時(shí)間過長或過短等，都可能影響轉(zhuǎn)化效率。比如冰浴時(shí)間太短，細(xì)胞可能還未充分吸收質(zhì)粒就被；熱激溫度過高或時(shí)間過長，又會把細(xì)胞“燙死”，這些都會導(dǎo)致涂板結(jié)果不理想。

5.培養(yǎng)基或操作過程中染菌：培養(yǎng)基滅菌不徹底或者涂布過程中存在污染會導(dǎo)致雜菌大量產(chǎn)生。

6.固體培養(yǎng)基忘記加抗生素。

解決方法

1.感受態(tài)細(xì)胞質(zhì)量不佳：更換感受態(tài)細(xì)胞，確保感受態(tài)的質(zhì)量和純度合格，嚴(yán)感受態(tài)細(xì)胞儲存于-80℃，避免反復(fù)凍融

2.質(zhì)粒濃度過高：調(diào)整質(zhì)粒濃度，一般50-100ng/ul即可

3.涂板菌液量過多：減少涂板菌液量，涂板完成后靜置幾分鐘再倒置培養(yǎng)4.轉(zhuǎn)化操作不當(dāng)：轉(zhuǎn)化過程中42℃熱激45-60S即可復(fù)蘇（加入無抗LB搖菌）時(shí)間大于1小時(shí)

5.培養(yǎng)基或操作過程中染菌固體培養(yǎng)基忘記加抗生素或抗生素失效：重新配置培養(yǎng)基，確保實(shí)驗(yàn)過程無菌操作。

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