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細胞轉染是指將外源分子（如DNA，RNA等）導入（真核） 細胞的實驗技術之一。隨著分子生物學和細胞生物學研究的不斷發(fā)展，轉染已經(jīng)成為研究和控制真核細胞基因功能的常規(guī)工具。

除轉染以外，關于基因片段轉移的方法還有很多，像轉化，轉導，感染等，為了避免混淆，更好地區(qū)分這些概念，我們做了一個小總結。

   轉染（Transfection）：指重組質(zhì)粒載體或游離核苷酸在脂質(zhì)體等介導下進入真核細胞。

   轉化（Transformation）：指含外源基因的重組質(zhì)粒（載體）將外源基因直接導入原核細胞（如細菌），使之獲得新的遺傳特性。

   轉導（Transduction）：指通過重組病毒載體將外源基因導入真核細胞或原核細胞，從而引起的基因重組現(xiàn)象。

   感染（Infecion）：重組病毒載體入侵受體細胞導致的病理生理過程。

言歸正傳，還是要說到我們今天的主角——細胞轉染。

細胞轉染可分為瞬時轉染和穩(wěn)定轉染，瞬時轉染指外源DNA/RNA不整合到宿主染色體中,通常只持續(xù)幾天，在轉染后24-72小時內(nèi)分析結果，多用于啟動子和其他調(diào)控元件的分析。穩(wěn)定轉染指外緣DNA既可以整合到宿主染色體中。通常需要通過一些選擇性標記來篩選以得到穩(wěn)定轉染的細胞系。根據(jù)轉染方法可以分為物理介導、化學介導和生物介導。

我們常用的細胞轉染方法有電穿孔法、顯微注射、基因槍、脂質(zhì)體轉染，磷酸鈣共沉淀法、原生質(zhì)體轉染、病毒介導的轉染。

不同的轉染方法有不同的特點，在轉染實驗時根據(jù)實驗室的具體條件（包括已有設備）確定最佳轉染方法，我們?yōu)榇蠹铱偨Y了一些常用轉染方法的特點及適用細胞范圍：

顯微注射：最精確，成本最高；

磷酸鈣法：最樸實，成本最低；

脂質(zhì)體/聚合物法：最常規(guī)，工具細胞最佳選擇，但不一定所有細胞都適合；

電轉法：非工具細胞最佳選擇，常用于難轉染/轉染效率低的細胞系或者建立篩選細胞株，關鍵是要有儀器-點轉移。

細胞轉染做的好不好除了受轉染方法的影響外，還有很多別的影響因素，像細胞狀態(tài)和密度、培養(yǎng)基、載體大小等多方面因素都會影響到我們最后的轉染效率，所以細胞轉染是一個常見但是卻并不簡單的實驗，盡管如此，我們還是要努力追求最理想的細胞轉染原則——轉染效率高、細胞毒性小、重復性好、安全、方法簡單、省時、經(jīng)濟。因此，我們技術部的老師們特別提醒大家留心以下注意事項：

1、轉染前細胞必須處于良好的生長狀態(tài)，不建議為了趕實驗周期而在細胞生長狀態(tài)不穩(wěn)定或較差的時候強行轉染。（磨刀不誤砍柴工，調(diào)整好狀態(tài)，轉染效率更佳哦?。?/span>

2、建議做好轉染預實驗，摸索最合適于細胞的轉染手段及轉染體系，尤其原代細胞、懸浮細胞、淋巴細胞等，不建議所有細胞一個轉染操作標準；同時設置工具細胞（293T）轉染對照組。（具體情況具體分析，不要想著一招鮮吃遍天哦?。?/span>

3、不同目的/片段類型推薦使用不同的轉染試劑，轉染試劑的選擇要慎重。（別買到水貨假貨啦！~）

4、質(zhì)粒純度：A260/A280比值(1.7-1.9)，越近1.8越好；

5、質(zhì)粒濃度：細胞轉染的質(zhì)粒濃度不低于500μg/μL，病毒包裝的質(zhì)粒濃度不低于0.8μg/μL；

6、轉染質(zhì)粒必須用去內(nèi)毒素試劑盒去除內(nèi)毒素；

7、病毒包裝的質(zhì)粒建議采用非過濾柱型大提試劑盒進行質(zhì)粒的提取；

8、建議使用非血清型轉染培養(yǎng)基；

9、轉染試劑及轉染復合物使用后立即蓋好蓋子，避免長時間暴露在空氣中，影響轉染效率；

10、不要使用凍結的或儲存溫度低于4℃的脂質(zhì)體試劑；

簡單介紹過后大家可能會迫不及待地想知道，細胞轉染到底是怎么做的呢，接下來介紹常見的轉染方法。

接下來就是欣賞我們經(jīng)典案例的時候了：

最后的最后是給客戶爸爸們的小小的建議，非常感謝各位老師們選擇我們實驗室，為了不辜負老師們的信任，為了得到真實又靠譜的檢測結果，也為了和平與愛，我們有一些小小的要求：

① 提供質(zhì)粒的時候，最好同時提供一下質(zhì)粒圖譜，以便技術部的老師們查看篩選標記及熒光標簽蛋白，做轉染時也好加做一個質(zhì)粒陽性轉染對照哦。

② 由于質(zhì)粒的濃度和純度會影響轉染的效率，所以老師們提供的質(zhì)粒在郵寄給我們前，最好也做下質(zhì)粒的濃度/純度的測定。

③ 如果需要用到老師們自己提供的試劑時，郵寄前請先跟我們技術支持聯(lián)系哦，按照樣品提供要求要求進行寄送。

這些都是避免您珍貴的樣本被浪費，或在運輸途中造成損失的避免方法哦~！