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    非酒精性脂肪性肝炎（NASH）是NAFLD的進展階段，表現(xiàn)為肝臟脂肪變性、炎癥和纖維化。在NASH小鼠模型研究中，肝重比（Liver/Body Weight Ratio）、血清ALT（丙氨酸氨基轉移酶）、肝臟TG（甘油三酯）是評估疾病進展的核心指標。

——非酒精性脂肪肝（NASH）小鼠模型關鍵指標檢測指南由普拉特澤生物動物實驗平臺為大家總結分享。普拉特澤生物為廣大科研人員提供長期穩(wěn)定的非酒精性脂肪肝小鼠模型外包實驗服務——本文將詳細介紹這些指標的檢測原理、實驗步驟及常見問題解決方案，幫助科研人員獲得準確、可重復的數(shù)據(jù)。

1. 肝重比（Liver/Body Weight Ratio）檢測

意義：評估肝臟腫大程度，反映脂肪沉積和炎癥程度。

實驗步驟

●小鼠稱重：禁食4-6小時后，稱量小鼠體重（g）。

●肝臟摘取：安樂死后迅速取出完整肝臟，用預冷PBS沖洗血跡，濾紙吸干表面水分。

●稱肝重：精確稱量肝臟濕重（g）。

計算肝重比：

注意事項

?標準化操作：所有小鼠禁食時間一致，避免食物影響肝臟重量。

? 快速取材：肝臟離體后易失水，需在10分鐘內完成稱重。

?排除異常樣本：若肝臟有肉眼可見腫瘤或嚴重壞死，需記錄并剔除。

2. 血清ALT（丙氨酸氨基轉移酶）檢測

意義：ALT是肝損傷的關鍵標志物，NASH模型中ALT升高提示肝細胞損傷。

●實驗方法

（1）采血與血清制備

眼眶取血/心臟穿刺：收集全血至EP管，室溫靜置30分鐘。

離心分離血清：4℃、3000 rpm離心15分鐘，取上清（避免溶血）。

（2）ALT檢測（推薦試劑盒法）

原理：ALT催化丙氨酸和α-酮戊二酸反應生成丙酮酸，通過檢測NADH吸光度變化（340 nm）計算酶活性。

步驟：按試劑盒（如碧云天ALT檢測試劑盒）說明書操作，通常包括：
1.配制反應混合液

2.加入血清樣本

3.酶標儀測定OD值

4.根據(jù)標準曲線計算ALT濃度（U/L）

常見問題與優(yōu)化

溶血影響：紅細胞破裂會釋放ALT，導致假陽性，需輕柔操作避免溶血。

樣本保存：血清4℃可存24小時，-80℃長期保存（避免反復凍融）。

3. 肝臟TG（甘油三酯）檢測

意義：TG沉積是NASH的核心特征，定量TG可評估脂肪變性程度。

?實驗流程

（1）肝臟樣本處理

組織勻漿：取50-100 mg肝組織，加入1 mL異丙醇（或氯仿:甲醇=2:1），勻漿器冰上破碎。

離心提取脂質：12,000 rpm、4℃離心10分鐘，取上清。

（2）TG測定（推薦GPO-PAP法）

原理：甘油三酯被脂蛋白脂肪酶水解為甘油，經(jīng)酶偶聯(lián)反應生成醌亞胺，在546 nm測吸光度。

步驟（以南京建成試劑盒為例）：

配制工作液

①加入樣本和標準品

②37℃孵育10分鐘

③酶標儀檢測，計算TG含量（mmol/g蛋白或mg/g組織）

關鍵注意事項

⒈標準化取樣：同一肝葉位置（如左葉）取樣，避免區(qū)域差異。

⒉校正總蛋白：建議用BCA法測勻漿總蛋白，以mmol/mg蛋白為單位更準確。

4. 數(shù)據(jù)解讀與NASH模型驗證

⒈肝重比：NASH小鼠通常＞5%（正常小鼠約4%）。

⒉ALT：NASH模型ALT＞50 U/L（正常＜30 U/L）。

⒊TG：高脂飲食模型TG可達正常肝的3-5倍。

建議結合其他指標：

組織學（HE染色觀察脂肪變性、天狼星紅染色評估纖維化）

炎癥因子（TNF-α、IL-6 ELISA）

5. 實驗優(yōu)化與FAQ

 Q：ALT檢測為何要用空腹血清？

→ A：進食后脂血可能干擾吸光度檢測。

 Q：TG提取用異丙醇還是氯仿-甲醇？

→ A：異丙醇更安全，但氯仿-甲醇提取效率更高（需通風櫥操作）。

 Q：肝重比異常高可能原因？

→ A：除脂肪沉積外，需排除肝臟充血、腫瘤或采樣誤差。

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