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有一個朋友來找我咨詢用流式檢測細胞因子的問題，他之前用ELISA 檢測細胞因子的話，發(fā)現(xiàn)樣本量需求很多，然而有些樣本量又比較少怎么辦呢，那么接下來我來對比幾種檢測細胞因子的優(yōu)缺點，供各位大大們閱讀參考啦~

細胞因子（cytokine，CK）：是由免疫細胞（如單核、巨噬細胞、T細胞、B細胞、NK細胞等）和某些非免疫細胞（內皮細胞、表皮細胞、纖維母細胞等）經刺激而合成（一般是免疫細胞）、分泌的一類生物活性物質分泌的蛋白質，在體內廣泛參與免疫調節(jié)及炎癥反應、組織修復、刺激造血系統(tǒng)、刺激細胞的增殖與凋亡等重要生理活動，在抵抗外來病原及維持機體內環(huán)境平衡中均起重要作用。

細胞因子的作用方式：自分泌作用、旁分泌作用、內分泌作用。

細胞因子的作用特點：多效性、重疊性、協(xié)同性、拮抗性和雙重性。

根據(jù)產生細胞因子的細胞種類不同分類：白細胞介素（interleukin, IL)、干擾素（interferon, IFN)、腫瘤壞死因子（tumor necrosis factor, TNF)、轉化生長因子-β家族（transforming growth factor-β family, TGF-β family)、集落刺激因子（colony stimulating factor, CSF)、趨化因子（chemokinefamily)、生長因子（growth factor,GF）等。

細胞因子的檢測方法一般分為生物學、分子生物學測定法及免疫學（重點介紹）

1、生物學測定法 其原理是根據(jù)細胞因子對特定的依賴性細胞株(即靶細胞)的促增殖作用,以增殖細胞中的DNA的合成或酶活性為指標,間接推算出細胞因子的活性單位,如對IL-1、IL-2等細胞因子活性的檢測。亦可根據(jù)某些細胞因子對特定靶細胞的殺傷效應或對病毒的抑制作用進行測定,如對腫瘤壞死因子及干擾素的生物活性測定。

2、分子生物學測定法 目前采用的技術有各種印跡法、斑點雜交、原位雜交和PCR等。通過檢測細胞內細胞因子的基因組成或mRNA量,推算出細胞因子的合成量。

3、免疫學檢測法 其基本原理是將細胞因子作為抗原進行定量檢測。如免疫斑點法、ELISA法、免疫印跡法和流式細胞儀等均已用于細胞因子的檢測。

細胞因子的檢測方法對比

1、酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）

原理：使抗原或抗體與某種酶連接成酶標抗原或抗體，這種酶標抗原或抗體既保留其免疫活性，又保留酶的活性。由于酶的催化頻率很高，故可放大反應效果，從而使測定方法達到很高的敏感度。

優(yōu)點：避免特異性抗體直接標記，便宜。

缺點：所需樣本量多、每次僅能測定一項細胞因子、操作步驟和測定時間過長、酶聯(lián)反應所致的人工假象

2、流式細胞儀（CBA）

原理：利用微小、分散的顆粒捕獲液體待測物，并利用流式細胞儀檢測類似“三明治”的顆?！郎y物復合體所散發(fā)的熒光，從而測定待測物的數(shù)量。

優(yōu)點：所需樣本量少、快速（實驗6-8h可以完成）操作簡便、靈敏度高、重復性好、高效（同一個樣品可以同時檢測多個因子）、安全、接近生物體的分析條件（全血檢測保留細胞及生化微環(huán)境更準確反應了體內狀況）。

缺點：價格略貴

3、免疫印跡法（WB）

原理：是通過聚丙烯酰胺凝膠電泳分離細胞或者組織樣本中的蛋白，經轉膜、封閉后目標蛋白與特有性一抗結合，再與辣根過氧化物酶（HRP）標記的第二抗體起反應，經過底物顯色，分析曝光條帶的位置和灰度分析獲知目標蛋白在樣本中的表達情況

優(yōu)點：高特異性、高敏感性

缺點：細胞因子分析量較小，用WB進行檢測有些不合適

附兩張流式檢測的圖：