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支原體檢測(cè)實(shí)驗(yàn)方法介紹由普拉特澤生物表達(dá)檢測(cè)平臺(tái)總結(jié)分享。支原體是一類(lèi)無(wú)細(xì)胞壁、形態(tài)多樣的原核細(xì)胞微生物，是目前發(fā)現(xiàn)的最小的微生物，普拉特澤生物表達(dá)檢測(cè)平臺(tái)為廣大科研人員提供支原體檢測(cè)實(shí)驗(yàn)外包服務(wù)，歡迎咨詢(xún)哦。

支原體在細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)、傳代時(shí)極易污染。目前我們常用的支原體檢測(cè)方法有PCR法、DNA染色法、化學(xué)發(fā)光法、支原體培養(yǎng)法，我們來(lái)一個(gè)一個(gè)看：

1、PCR檢測(cè)支原體

這種方法是目前最常用的方法，它的檢測(cè)方式主要有凝膠電泳檢測(cè)和熒光定量檢測(cè)。其原理都是在支原體16S rRNA基因的保守區(qū)設(shè)計(jì)引物，通過(guò)檢測(cè)支原體DNA來(lái)檢測(cè)細(xì)胞中有無(wú)支原體的污染。如果有支原體的存在，則在瓊脂糖凝膠電泳或者熒光定量擴(kuò)增時(shí)，就可以檢測(cè)到。這種方法的優(yōu)點(diǎn)是檢測(cè)靈敏度高，特異性好，檢測(cè)速度快。

2、DNA染色法檢測(cè)支原體

原理為使用DNA染色試劑（如：Hoechst 33258）對(duì)細(xì)胞進(jìn)行染色，由于支原體中的核酸也可以被著色，所以，如果有支原體污染，會(huì)在細(xì)胞表面或者培養(yǎng)基中見(jiàn)到大小不等、不規(guī)則的熒光著色顆粒，與細(xì)胞核呈現(xiàn)的橢圓形、更大更亮熒光形成鮮明對(duì)比。這種方法有很多種實(shí)驗(yàn)檢測(cè)方式，如果作為簡(jiǎn)單檢測(cè)來(lái)說(shuō)，最大的優(yōu)點(diǎn)就是快速，直觀(guān)；但是它的靈敏度會(huì)比較低，在支原體污染不嚴(yán)重時(shí)容易得到模棱兩可的結(jié)果，只有在污染嚴(yán)重時(shí)才能得到可靠度較高的結(jié)果。小伙伴們?nèi)绻褂眠@種方法來(lái)進(jìn)行比較嚴(yán)謹(jǐn)?shù)臋z測(cè)，可參考《中國(guó)藥典》中的方法（見(jiàn)附錄）來(lái)設(shè)置相應(yīng)的對(duì)照及判定標(biāo)準(zhǔn)，但是相應(yīng)的檢測(cè)時(shí)間會(huì)有所延長(zhǎng)。

3、化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)支原體

化學(xué)發(fā)光檢測(cè)的原理是利用支原體內(nèi)特有的酶，與提供的底物相互作用，使其中的ADP轉(zhuǎn)化為ATP，熒光素酶可以利用產(chǎn)生的ATP與熒光素酶底物發(fā)生反應(yīng)，產(chǎn)生可檢測(cè)到的光，光可以被我們使用儀器檢測(cè)到。如果沒(méi)有支原體存在，熒光素酶就沒(méi)有足夠的ATP去發(fā)生反應(yīng)產(chǎn)生光，儀器檢測(cè)到的數(shù)值就比較低；如果有支原體存在，就可以使大量的ADP轉(zhuǎn)化為ATP，供熒光素酶發(fā)生反應(yīng)，產(chǎn)生大量的光，儀器檢測(cè)到的數(shù)值就比較高。這種方法的優(yōu)點(diǎn)是檢測(cè)的靈敏度高，速度快，但是只能檢測(cè)活的支原體。

4、支原體培養(yǎng)法

使用支原體肉湯培養(yǎng)基接種待測(cè)樣品（細(xì)胞培養(yǎng)上清等），經(jīng)過(guò)約7-21天的培養(yǎng)，觀(guān)察有無(wú)支原體的生長(zhǎng)，以此來(lái)判斷細(xì)胞培養(yǎng)基中有無(wú)支原體存在。此種方法非常經(jīng)典，得到全世界范圍內(nèi)認(rèn)可，是被《中國(guó)藥典》2015版第三部分3301，歐洲藥典第六版2.6.7部分記載的支原體檢測(cè)方法。雖然被廣泛認(rèn)可，但是需要耗時(shí)超級(jí)長(zhǎng)（約1個(gè)月）才能知道是否有污染。

好啦，這四種常見(jiàn)的支原體檢測(cè)方法小編就介紹完啦！有沒(méi)有幫到您呢？更多的關(guān)于支原體檢測(cè)疑問(wèn)或者檢測(cè)方法請(qǐng)等待小編下期的分享哦，如果您也有支原體檢測(cè)外包的需求的話(huà)歡迎隨時(shí)給客服留言哦！

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