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  細(xì)胞增殖與細(xì)胞活性檢測

—— 四大法寶MTT&CCK8&MTS&EdU

小編在大量的客戶接洽過程中，發(fā)現(xiàn)很多客戶爸爸經(jīng)?；煜?xì)胞增殖或細(xì)胞活性這兩個概念。其實應(yīng)為..確實挺容易混淆的哈哈哈哈哈！

因為檢測手段和檢測原理十分相近，所以經(jīng)常被忽略二者概念上的區(qū)別。但是！我們還是要知道細(xì)胞增殖能力，以及細(xì)胞活性的區(qū)別，才能更好的利用實驗方法去達(dá)到檢測目的不是嘛。

我們先了解一下細(xì)胞增殖和細(xì)胞活性這兩個基本概念：

細(xì)胞增殖是活細(xì)胞的重要生理功能之一，是生物體的重要生命特征 ，是生物體生長、發(fā)育、繁殖以及遺傳的基礎(chǔ)。細(xì)胞增殖是指細(xì)胞在周期調(diào)控的因子下，通過DNA復(fù)制等反應(yīng)，完成細(xì)胞分裂的過程。增殖檢測一般是分析分裂中的細(xì)胞數(shù)量的變化，進(jìn)而反應(yīng)細(xì)胞的生長狀態(tài)及活性，細(xì)胞增殖檢測主要分為四類：DNA合成檢測、代謝活性檢測、細(xì)胞增殖相關(guān)抗原檢測和ATP濃度檢測。

細(xì)胞活性是判斷體外培養(yǎng)細(xì)胞在某些條件下是否能正常生長的重要指標(biāo)，如藥物處理、放射性或紫外線照射、培養(yǎng)條件變化等。細(xì)胞活性檢測指標(biāo)通常包括細(xì)胞膜對核酸染料的通透性、代謝活性、膜電位等。

細(xì)胞活性的檢測相當(dāng)于細(xì)胞增殖能力的測定，采用特殊的試劑測定細(xì)胞的代謝活力或細(xì)胞代謝產(chǎn)物，通過檢測細(xì)胞的氧化還原活性反映細(xì)胞增殖能力，屬于間接檢測細(xì)胞增殖能力的方法。

細(xì)胞增殖的研究方法有很多，主要包括:MTT、MTS、CCK8、Edu等，其中EdU檢測方法是最新的細(xì)胞增殖檢測方法。

今天，主要想給大家介紹一下MTT、CCK8和MTS。

細(xì)胞檢測課程：http://weike.fm/R403947292

MTT：活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶甲臜（Formazan）并沉積在細(xì)胞中，而死細(xì)胞無此功能。二甲基亞砜（DMSO）能溶解細(xì)胞中的甲臜，用酶聯(lián)免疫檢測儀在490nm波長處測定其光吸收值，可間接反映活細(xì)胞數(shù)量。在一定細(xì)胞數(shù)范圍內(nèi)，MTT結(jié)晶形成的量與細(xì)胞數(shù)成正比。

CCK8：在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-Methoxy?PMS）的作用下被細(xì)胞線粒體中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲臜產(chǎn)物。生成的甲臜物的數(shù)量與活細(xì)胞的數(shù)量成正比。用酶聯(lián)免疫檢測儀在450nm波長處測定其光吸收值，可間接反映活細(xì)胞數(shù)量。

MTS：是一種在MTT基礎(chǔ)上的改良試劑，含有一個新型的四唑化合物和一種電子偶聯(lián)劑（ｐｈｅｎａｚｉｎｅ?。澹簦瑁铮螅?/span>一種有色的甲臜產(chǎn)物，可直接溶解于培養(yǎng)基中。這種轉(zhuǎn)化是在代謝活躍的細(xì)胞中的脫氫酶產(chǎn)生的NADPH或NADH的作ｌｆａｔｅ，PES），PES具有增強(qiáng)的化學(xué)穩(wěn)定性，這使它可與MTS混合形成穩(wěn)定的溶液。MTS被細(xì)胞生物還原成為用下完成的。在490 nm處檢測到的甲臜產(chǎn)物的量與培養(yǎng)中的活細(xì)胞數(shù)成正比。

為了讓大家更直觀的了解到這三種檢測方法的聯(lián)系與區(qū)別，我們采用了列表的方法：

除了這三種最常見的檢測方法以外，還想給大家介紹一下最新的細(xì)胞增殖檢測方法——EdU檢測方法。

EdU：是一種胸腺嘧啶核苷類似物，能夠在細(xì)胞增殖時期代替T滲入正在復(fù)制的DNA分子，通過基于EdU與Apollo?熒光染料的特異性反應(yīng)檢測DNA復(fù)制活性，通過檢測EdU標(biāo)記便能準(zhǔn)確地反映細(xì)胞的增殖情況。EdU檢測方法更快速、更靈敏、更準(zhǔn)確。EdU檢測染料在細(xì)胞內(nèi)很容易擴(kuò)散，無需DNA變性(酸解、熱解、酶解等)即可有效檢測，可有效避免樣品損傷，在體外細(xì)胞和體內(nèi)組織水平能更準(zhǔn)確地反映細(xì)胞增殖等現(xiàn)象。

當(dāng)您根據(jù)具體的實驗情況選擇了合適的檢測方法的時候，發(fā)現(xiàn)檢測結(jié)果還是不理想，問題出在哪呢？

下面小編為您整理了以下實驗操作注意事項，希望能對您有所幫助：

1 、鋪板

細(xì)胞數(shù)量：在前期細(xì)胞培養(yǎng)中，觀察細(xì)胞貼壁率、貼壁后面積大小倍增時間；以確保處理過程中不會細(xì)胞過滿（鋪板太密或長太久，細(xì)胞都會擠死掉的！），準(zhǔn)確呈現(xiàn)處理因素與細(xì)胞數(shù)的關(guān)系（5×103 ~10×103 ）。意思就是先了解下你需要檢測的細(xì)胞，做個預(yù)實驗先。

2、避免血清的干擾

用含胎牛血清培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞時，高濃度血清物質(zhì)（我也會吸光噠?。绊懺囼灴椎奈舛戎?，降低實驗敏感度。

3、防止邊緣效應(yīng)及復(fù)孔設(shè)置

應(yīng)在96孔板邊緣滴加PBS（別省那點板子啊?。?，邊緣孔的水分揮發(fā)較快，藥物易被濃縮，對實驗影響很大。復(fù)孔，做3-5個，推薦5個（別省那點板子?。。?。