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裸鼠皮下成瘤實(shí)驗(yàn)操作注意事項(xiàng)【新手友好】

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1、裸鼠成瘤細(xì)胞系的選擇與狀態(tài)

并非所有的腫瘤細(xì)胞都可以成瘤。在正式做實(shí)驗(yàn)之前，建議去查查ATCC上面的測(cè)試數(shù)據(jù)。如果不得不用不能獨(dú)立成瘤或者難以成瘤的細(xì)胞系，請(qǐng)看第三點(diǎn)選NOD SCID小鼠，以及第四點(diǎn)的Matrigel法。

細(xì)胞的狀態(tài)是成瘤實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵，所以細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)一定要好，取處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，細(xì)胞達(dá)80-90%左右密度為宜。收集細(xì)胞前一天晚上更換新鮮培養(yǎng)基。

2、成瘤細(xì)胞的處理

細(xì)胞消化后應(yīng)盡快接種到裸鼠皮下，一般盡量在半小時(shí)內(nèi)完成，途中將細(xì)胞懸液放在冰上降低細(xì)胞的代謝。細(xì)胞接種量1*10⁷/200ul/只，或者濃縮為1*10⁷/100ul/只，根據(jù)腫瘤細(xì)胞成瘤效果調(diào)整細(xì)胞量，最高不要超過(guò)1*107。接種腫瘤實(shí)驗(yàn)一般采用4--6周齡的裸鼠，裸鼠太老會(huì)加大成瘤難度，放大個(gè)體差異。

3、裸鼠成瘤接種部位

選擇的裸鼠一般在5-8周齡，體重18-20g左右，種植部位選擇血供豐富區(qū)域，如腋窩中后部、腹股溝中上部、背部、腋下、頸部均可以，當(dāng)然腋下和頸部效果最好。

4、裸鼠皮下接種操作

接種前用槍將細(xì)胞懸液充分的吹散，防止細(xì)胞成團(tuán)而降低細(xì)胞成活率；接種時(shí)，針頭在皮下進(jìn)針深一點(diǎn)，約1cm深，減少注射后細(xì)胞懸液從針眼溢出；左手拇指和食指捏緊裸鼠頸背部皮膚，小拇指夾住裸鼠尾巴；接種后一周左右可以見(jiàn)到皮下開(kāi)始出現(xiàn)腫塊。

5、皮下腫瘤大小

根據(jù)腫瘤細(xì)胞的特性和接種細(xì)胞的量，一般皮下成瘤的周期為1-2個(gè)月。腫瘤不宜生長(zhǎng)過(guò)大，一般不要超過(guò)1000mm3。腫瘤大小測(cè)量一般為1周兩次，游標(biāo)卡尺測(cè)量腫瘤最長(zhǎng)和最短部位。V=1/2ab2 (a為長(zhǎng)軸，b為短軸)。

6、皮下腫瘤保存

皮下瘤取下后一部分凍液氮用作以后提蛋白和RNA，一部分福爾馬林固定用做免疫組化、免疫熒光等。

好啦，那關(guān)于裸鼠皮下成瘤的注意事項(xiàng)我們就講解到這里啦，還有更多不懂的歡迎留言一起討論解決~

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