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科研小白看的ELISA酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)簡(jiǎn)介與原理【附視頻教程】

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ELISA酶聯(lián)免疫吸附

以前經(jīng)常聽(tīng)到學(xué)長(zhǎng)學(xué)姐天天說(shuō)ELISA，科研小白因?yàn)樯险n不認(rèn)真，聽(tīng)得有些迷迷糊糊，有個(gè)五六分懂，本文就給小白們從簡(jiǎn)介原理分類方法細(xì)細(xì)講講，梳理夯實(shí)一下基礎(chǔ)。

什么是ELISA酶聯(lián)免疫吸附（enzyme linked immunosorbent assay，簡(jiǎn)稱ELISA）？

酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（enzyme linked immunosorbent assay）是將可溶性的抗原或抗體結(jié)合到聚苯乙烯等固相載體上，利用抗原抗體特異性結(jié)合進(jìn)行免疫反應(yīng)的定性和定量檢測(cè)方法，即將已知的抗原或抗體吸附在固相載體表面，使酶標(biāo)記的抗原抗體反應(yīng)在固相表面進(jìn)行的技術(shù)。該技術(shù)可用于檢測(cè)大分子抗原和特異性抗體等，具有快速、靈敏、簡(jiǎn)便、載體易于標(biāo)準(zhǔn)化等優(yōu)點(diǎn)。

ELISA酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)原理是：

（1）使抗原或抗體結(jié)合到某種固相載體表面，并保持其免疫活性。

（2）使抗原或抗體與某種酶連接成酶標(biāo)抗原或抗體，這種酶標(biāo)抗原或抗體既保留其免疫活性，又保留酶的活性。

ELISA酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)方法：

1、直接法ELISA：其方法是將抗原按一定的比例稀釋好包被到固相載體上，然后加入稀釋好的特異性的酶標(biāo)抗體，孵育后加入底物顯色并判讀結(jié)果。直接ELISA操作很簡(jiǎn)單，步驟也比較簡(jiǎn)練，但是其應(yīng)用范圍還是非常有限的，一個(gè)重要的原因是這種ELISA中只經(jīng)過(guò)了一步信號(hào)放大（酶的放大），所以其靈敏度不是很高；另外，其測(cè)定的對(duì)象也非常有限，只能測(cè)定酶標(biāo)記的分子。

2、間接法ELISA：一般用來(lái)檢測(cè)抗體。其基本原理是：將一定量的抗原物包被于聚苯乙烯微孔板，加入無(wú)關(guān)蛋白載體封閉未結(jié)合位點(diǎn)后，加入待測(cè)樣本，然后加入酶標(biāo)二抗，經(jīng)孵育和洗滌后，加底物顯色。本法只要更換不同的固相抗原，可以用一種酶標(biāo)抗體檢測(cè)各種與抗原相應(yīng)的抗體。主要用于對(duì)病原體的檢測(cè)而進(jìn)行傳染病的診斷。

3、夾心法ELISA：其基本原理是將一定量的包被抗體以物理吸附的方法固定于聚苯乙烯微孔板表面，加入無(wú)關(guān)蛋白載體封閉未結(jié)合位點(diǎn)，然后加入含有抗原之待測(cè)樣品，通過(guò)加入酶標(biāo)記特異性抗體后用TMB底物顯色，微孔板中顏色的深淺與待測(cè)物的濃度呈正相關(guān)。該方法適用于測(cè)定二價(jià)或二價(jià)以上的大分子抗原，不適用于測(cè)定半抗原及小分子單價(jià)抗原，因其不能形成兩位點(diǎn)夾心。

4、競(jìng)爭(zhēng)法ELISA：首先將特異性抗體吸附于固相載體表面，經(jīng)洗滌后分成兩組：一組加酶標(biāo)記抗原和被測(cè)抗原的混合液；而另一組只加酶標(biāo)記抗原，再經(jīng)孵育洗滌后加底物顯色，這兩組底物降解量之差，即為所要測(cè)定的未知抗原的量。這種方法所測(cè)定的抗原只要有一個(gè)結(jié)合部位即可，因此，對(duì)小分子抗原如激素和藥物之類的測(cè)定常用此法。

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