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這是 qPCR 擴(kuò)增的全過程，分 3 個(gè)階段：

1. 起始期：剛開始循環(huán)，DNA 剛復(fù)制，熒光信號弱，和背景噪音差不多，儀器檢測不到明顯變化；

2. 指數(shù)期：DNA 片段以 2?的速度快速復(fù)制，熒光信號呈指數(shù)增長，這個(gè)階段的擴(kuò)增效率最穩(wěn)定，是最能反映模板初始量的階段；

3. 平臺(tái)期：原料耗盡，擴(kuò)增減速，熒光信號不再增加，曲線趨于平緩。

CT 值：“熒光達(dá)標(biāo)” 時(shí)的循環(huán)數(shù)。上圖中那條灰色的閾值線（Threshold），是儀器設(shè)定的可檢測熒光信號閾值。CT 值（Cycle Threshold），就是熒光信號剛好跨過這條門檻時(shí)，PCR 已經(jīng)跑了多少個(gè)循環(huán)。

綠色曲線：在更早的循環(huán)就達(dá)標(biāo) → CT 值更?。ㄕf明它的初始量多，只需要跑幾圈就到閾值線）

 紅色曲線：需要更多循環(huán)才能達(dá)標(biāo) → CT 值更大（說明它初始含量低，需要多跑幾圈才能到閾值線）。

qPCR 的定量原理很直接：如果樣品里的目標(biāo)基因初始含量越高，DNA 復(fù)制到 “能被檢測到” 的速度就越快，對應(yīng)的 CT 值就越??；反之，初始含量越低，CT 值就越大。

比如

 過表達(dá)（OE）組的 CT 值 < 對照組 → 說明目標(biāo)基因表達(dá)量更高

敲低（KD）組的 CT 值 > 對照組 → 說明目標(biāo)基因表達(dá)量更低。

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